公开(公告)号：CN115786480A

公开(公告)日：2023-03-14

申请号：CN202211530967.1

申请日：2022-12-01

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 熊磊 ,  刘昭霞 ,  李泽云 ,  沈玲玲 ,  尤民生 ,  尤士骏

IPC: C12Q1/6869 ,  C12N15/89 ,  A01K67/033

Abstract: 本发明公开了一种基于小菜蛾成虫基因组DNA的粗提筛选PxPolycalin纯合突变品系的方法，包括如下步骤：1)注射sgRNA和Cas9蛋白混液至15min内产的小菜蛾卵中；2)待其正常羽化后与野生型品系进行交配，提取已产卵的G0代亲本成虫基因组DNA粗提液，并进行PCR扩增、测序；3)选择有突变的G0代子代(G1代)进行自交，保留亲本(G1代)突变类型一致的G2代个体即为纯合突变品系；本发明操作简单，大幅度减少了实验所用的时间，适用于大量昆虫样本的基因组DNA提取，尤其是基于CRISPR/Cas9技术筛选基因组纯合突变品系。此外，本发明所用到的试剂成本低廉，容易配制，保存方法简单，对操作人员友好。本发明的方法实用性广，能应用于多种昆虫不同组织/发育阶段基因组DNA的提取。