公开(公告)号：CN117646018A

公开(公告)日：2024-03-05

申请号：CN202311482267.4

申请日：2023-11-09

Applicant: 江西农业大学

Inventor： 李骏 ,  万爽 ,  谢琳琳 ,  曹广祥 ,  唐宇航 ,  吕娜 ,  周雯雯 ,  孙超 ,  陆劲锋

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/66 ,  C12N15/54 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种多重耐药寡养单胞菌的基因敲除方法，以多重耐药MER1原始菌株，不残留额外抗生素耐药筛选标记，实现多重耐药菌中基因的无痕敲除。构建目的基因的新型自杀性敲除载体，利用热转法将导入同源臂后的敲除载体转化到大肠杆菌营养缺陷菌株WM3064中，利用载体上的CmR抗性基因，筛选出单交换后质粒插入的转化子；将该菌株过夜扩培后，利用载体上携带的sacB自杀基因进行反筛，即目的基因随整合入基因组的质粒载体环出后实现无痕脱落，本发明不引入抗生素耐药标签和外源序列，实现基因无缝敲除操作更为便捷高效，有助于后续基因的组合敲除和多位点编辑。

公开(公告)号：CN117646015A

公开(公告)日：2024-03-05

申请号：CN202311472755.7

申请日：2023-11-07

Applicant: 江西农业大学

Inventor： 李骏 ,  方诗琦 ,  唐宇航 ,  陈国庆 ,  周雯雯 ,  谢琳琳 ,  孙超 ,  万爽

IPC: C12N15/70 ,  C12N9/02 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供一种假单胞菌来源硫醌氧化还原酶体外表达纯化方法，并使其应用于丙硫醇的降解，该方法以一株高效降解丙硫醇的恶臭假单胞菌S‑1全基因组为模板，克隆硫醌氧化还原酶编码基因sqr，选择pET28a作为表达载体，将sqr基因和线性化的载体使用一步克隆的方法构建重组质粒pET28a‑sqr，通过热激转化导入大肠杆菌BL21，成功构建BL21/pET28a‑sqr表达菌株。经培养诱导后，超声破碎后通过重力法组氨酸标签纯化得到SQR蛋白。后续以BL21/pET28a作为对照菌株，基于气相色谱‑质谱仪GC‑MS(Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry)测定重组表达菌株及SQR蛋白转化丙硫醇能力。通过本发明提供的方法获得一种硫醌氧化还原酶并表征其转化丙硫醇的功能，将有利于硫醇降解菌的应用与改造。

公开(公告)号：CN116621784A

公开(公告)日：2023-08-22

申请号：CN202310514710.5

申请日：2023-05-09

Applicant: 江西农业大学

Inventor： 陈健 ,  万爽 ,  周雯雯 ,  彭大勇 ,  李骏 ,  孙超 ,  罗文静

IPC: C07D239/52 ,  G01N30/02 ,  G01N30/90 ,  G16C20/30

Abstract: 本发明公开了一种三氟嘧磺草胺代谢物的预测和制备方法，涉及农药检测技术领域，包括M‑1、M‑2以及M‑3；其中M‑1的结构式：M‑2的结构式：M‑3的结构式：本发明还提供了三氟嘧磺草胺主要代谢物M‑1、M‑2以及M‑3的制备方法，其合成方法的确定有利于进一步开展三氟嘧磺草胺主要代谢物在环境中的吸附/解吸、淋溶、迁移转化的环境行为研究和对水生生物(斑马鱼、黑壳虾)、陆生动物(赤子爱胜蚓)和两栖动物(蝌蚪)的急性毒性和慢性毒性的机理研究。