公开(公告)号：CN103114083A

公开(公告)日：2013-05-22

申请号：CN201210210409.7

申请日：2012-06-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  徐美娟 ,  司冠儒 ,  满在伟 ,  杨套伟 ,  张显 ,  刘项羽

IPC: C12N9/42 ,  C12R1/125

Abstract: 一种温度两阶段控制策略发酵生产β-甘露聚糖酶的方法，属于环境因素分阶段控制策略在发酵过程优化中的应用技术领域。本发明采用重组枯草芽孢杆菌BPM1003为出发菌株，菌体生长阶段，控制温度为37℃，发酵培养16h菌体生长基本达到稳定期，将发酵温度降到25℃，发酵至40h结束。采用此策略进行发酵，最终实现了提高β-甘露聚糖酶产量的目的。本发明的优点在于工艺简便易行，能有效地提高β-甘露聚糖酶的产量。同时对其它酶的发酵生产具有一定的指导意义。

公开(公告)号：CN102367448A

公开(公告)日：2012-03-07

申请号：CN201110289820.3

申请日：2011-09-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  刘项羽 ,  徐美娟 ,  杨套伟 ,  张显

IPC: C12N15/56 ,  C12N15/63 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/34 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种高效表达且易于纯化β-甘露聚糖酶的基因工程菌株的构建方法，其特征是根据NCBI公布的基因序列设计引物，在下游引物上添加了组氨酸序列，以Bacillus subtilis JNA染色体为模板克隆得到的β-甘露聚糖酶基因，用BamH I和Mlu I对PCR产物和质粒pMA5双酶切，利用T4DNA连接酶于16℃过夜连接，转化感受态Bacillus subtilis 168菌株，获得重组菌株BPM1003，将离心后的发酵液通过Ni-NTA柱一步纯化，得到了纯的β-甘露聚糖酶，其酶活力达到3768.7u/ml，比酶活达到4579.2u/mg。

公开(公告)号：CN102952789A

公开(公告)日：2013-03-06

申请号：CN201210360552.4

申请日：2012-09-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  徐美娟 ,  张显 ,  刘项羽

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N15/10 ,  C12N15/75 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种β-甘露聚糖酶耐酸性定点改造的方法，其特征是针对一种来源于枯草芽孢杆菌B.subtilis 6-7(CTCCM 2009200)的β-甘露聚糖酶在理性设计的基础上，通过重叠PCR技术进行定点突变，经定点改造后的β-甘露聚糖酶基因与表达载体pMA5连接，转化枯草芽孢杆菌168菌株，成功获得一株β-甘露聚糖酶耐酸性得到显著提高的重组菌株pMA5-gmuGb54/B.subtilis 168，其相对酶活力提高了6.2％，摇瓶水平酶活为3226.23U/mL，最适pH由6.5下降到5.5，此突变酶更利用应用在饲料工业中。