公开(公告)号：CN116970575A

公开(公告)日：2023-10-31

申请号：CN202310903552.2

申请日：2023-07-22

Applicant: 扬州大学

Inventor： 万志敏 ,  李亚锋 ,  龚简汐 ,  赵喆泓 ,  姜文杰 ,  汤婷 ,  叶建强 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  李拓凡 ,  谢泉

IPC: C12N7/01 ,  C12N7/02 ,  C12N15/861 ,  C12N15/34 ,  C12N15/44 ,  C12N15/12 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  A61K39/145 ,  A61K39/235 ,  A61K39/295 ,  A61P31/16 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术表达H7N9禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其的制备方法，H7N9禽流感病毒HA蛋白序列如SEQ ID NO.1所示；所述重组血清4型禽腺病毒，其中使用H7N9禽流感病毒HA基因替换血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因，替换的是血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸。本发明的关键技术是利用CRISPR‑Cas9技术在血清4型禽腺病毒中插入H7N9禽流感病毒HA基因以及带有LoxP位点的RFP表达盒，利用RFP蛋白进行病毒的纯化，纯化完成后使用Cre重组酶敲除RFP表达盒，最后获得可以稳定表达H7N9禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒。本发明构建的表达H7N9禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为制备血清4型禽腺病毒和H7N9禽流感病毒二联疫苗奠定了基础。