公开(公告)号：CN113832235A

公开(公告)日：2021-12-24

申请号：CN202111035954.2

申请日：2021-09-06

Applicant: 扬州大学

Inventor： 包文斌 ,  范海瑞 ,  吴正常 ,  任战士 ,  吴圣龙 ,  殷宗俊 ,  王海飞

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/113 ,  A61K45/00 ,  A61P1/12 ,  A61P31/04

Abstract: 本发明通过组学测序筛选出1个大肠杆菌F18感染调控的关键候选lncRNA‑FUT3‑AS1，序列为SEQ ID NO:1，在此基础上，本研究围绕FUT3‑AS1功能与调控机制开展深入分析，首先利用qPCR和Northern blot技术检测了FUT3‑AS1在梅山猪与苏太猪F18大肠杆菌敏感型与抗性型断奶仔猪十二指肠中的表达差异情况，成功建立lncRNA‑FUT3‑AS1沉默的猪小肠上皮细胞，干扰效率达到68%，且通过细菌计数、革兰氏染色、扫描电镜以及间接免疫荧光等一系列检测手段发现，沉默lncRNA‑FUT3‑AS1可以显著地降低F18大肠杆菌对IPEC‑J2细胞的黏附能力。由此表明，lncRNA‑FUT3‑AS1在断奶仔猪抵抗F18大肠杆菌侵染过程中发挥了重要的抗性调控功能，其表达水平下调降低了小肠上皮细胞对F18大肠杆菌的黏附能力，有助于提高仔猪对F18大肠杆菌侵染的抵抗能力。

公开(公告)号：CN112011539A

公开(公告)日：2020-12-01

申请号：CN202010867825.9

申请日：2020-08-26

Applicant: 扬州大学

Inventor： 王海飞 ,  周雅静 ,  包文斌 ,  范海瑞 ,  吴圣龙

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N5/071 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR-Cas9技术靶向敲除猪GDPD2基因的细胞系及其构建方法，该细胞系采用以下步骤制备：(1)根据猪GDPD2基因设计sgRNA向导序列；(2)将正链sgRNA序列和负链sgRNA序列退火形成双链DNA；将双链DNA与线性化的pGK1.1载体连接获得阳性打靶载体；(3)将阳性打靶载体混合电转染靶细胞IPEC-J2获得GDPD2基因敲除的IPEC-J2细胞。本发明首次利用CRISPR/Cas9技术建立猪GDPD2基因敲除的IPEC-J2细胞系，有助于研究GDPD2的蛋白功能。CRISPR/Cas9敲除技术方法简单，设计sgRNA即可对靶基因进行高效敲除，导致GDPD2基因功能的缺失，是理想的GDPD2基因敲除的IPEC-J2细胞模型。

公开(公告)号：CN115058418A

公开(公告)日：2022-09-16

申请号：CN202210012531.7

申请日：2022-01-06

Applicant: 扬州大学

Inventor： 任战士 ,  范海瑞 ,  吴圣龙 ,  吴正常 ,  包文斌

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/89 ,  C12N15/54 ,  A01K67/027 ,  C12Q1/6888 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  A61K49/00

Abstract: 本发明公开了一种构建Sec1基因敲除小鼠模型的方法，属于生物技术领域。采用Cas9/sg RNA注射受精卵的方法构建Sec1基因大片段敲除的小鼠模型，鉴定出野生型小鼠、杂合型小鼠和纯合型小鼠并对其进行表型分析、病理学分析、敲除前后对个体的影响和对睾丸发育、生精能力以及精子品质的影响的测定，以及Sec1基因本身的功能和分子机制分析，以期为该基因相关数据的补充和对个体功能的影响的数据探究提供了新的依据。

公开(公告)号：CN113106093A

公开(公告)日：2021-07-13

申请号：CN202110361953.0

申请日：2021-04-02

Applicant: 扬州大学

Inventor： 吴正常 ,  范海瑞 ,  靳健 ,  吴圣龙 ,  包文斌

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/6888 ,  G01N33/573 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体公开了FUT3基因作为靶点在提高猪对大肠杆菌抗性中的应用。本发明研究发现FUT3基因表达水平与大肠杆菌抗性密切相关。本研究从mRNA、蛋白质以及细胞水平上系统探讨了FUT3基因在仔猪抗F18大肠杆菌感染过程中发挥的重要作用，以期确定其可以作为细菌性腹泻重要的抗性候选功能基因，同时也将为之后在生猪生产中开展仔猪抗大肠杆菌腹泻病的分子选育提供科学根据。

公开(公告)号：CN118910282A

公开(公告)日：2024-11-08

申请号：CN202411197631.7

申请日：2024-08-29

Applicant: 扬州大学

Inventor： 包文斌 ,  陈晓蕾 ,  范海瑞 ,  朱霄阳 ,  王海飞 ,  吴正常

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种与猪呕吐毒素抗性的SNP标记及其应用，所述SNP标记在猪基因组上的位置为Chromosome 11：75541817，其碱基为C或A。该SNP可通过促进LIG4基因的表达而增强对DON的抗性；C/A突变可作为分子标记应用于猪霉菌毒素的抗病育种，可通过该SNP遗传标记辅助选择抗DON性能好的AA型个体，有利于提高群体的抗病性能，实现养猪企业经济效益最大化。

公开(公告)号：CN112899219A

公开(公告)日：2021-06-04

申请号：CN202011415326.2

申请日：2020-12-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 范海瑞 ,  包文斌 ,  吴圣龙 ,  吴正常 ,  王海飞

IPC: C12N5/075

Abstract: 本发明公开了一种小鼠腔前卵泡三维培养体系及其建立方法，提供了一种用于体外培养小鼠腔前卵泡的试剂组合，该试剂组合包含：藻酸盐溶液、CaCl2凝胶液、卵泡分离液(DM)、卵泡平衡液(MM)、卵泡酶解液(EM)、卵泡生长液(GM)、卵泡成熟液(MM1)和透明质酸酶。采用该试剂组合建立了一种小鼠腔前卵泡三维培养体系，该三维培养体系以藻酸盐凝胶为基质，以藻酸盐与Ca2+形成的凝胶滴为卵泡发育提供立体结构，再通过在不同的培养基质中进行培养，得到发育成熟的卵泡，进一步得到成熟的卵母细胞。

公开(公告)号：CN222240580U

公开(公告)日：2024-12-27

申请号：CN202420884140.9

申请日：2024-04-25

Applicant: 扬州大学

Inventor： 范海瑞 ,  陈晓蕾

IPC: B02C18/10 ,  B02C18/18 ,  B02C18/22 ,  B02C21/00 ,  B02C23/10 ,  B01F33/83 ,  B01F35/00 ,  B01D29/03

Abstract: 本实用新型涉及实验设备技术领域，提供了一种过滤式组织细胞匀浆机，包括：外壳，外壳底部固定连接有底座，外壳顶部固定连通有进料口，底座内固定连接有搅拌电机，搅拌电机的输出端连接有搅拌轴，搅拌轴中心开设有放置槽，搅拌轴侧壁开设有多个旋转槽，多个旋转槽与放置槽相连通，搅拌轴外壁固定连接有多个搅拌叶，多个搅拌叶连接旋转槽两侧的搅拌轴，放置槽内设置有切割组件。该过滤式组织细胞匀浆机通过设置切割组件，多个刀片随旋转轴转动对进入外壳内的溶液中的植物纤维进行切割，过滤网对溶液进行过滤，将过大的纤维拦在过滤网表面，随后过滤网下方的刀片对物料进一步切割，防止纤维结团，提高匀浆效果。

公开(公告)号：CN222226364U

公开(公告)日：2024-12-24

申请号：CN202420863028.7

申请日：2024-04-24

Applicant: 扬州大学

Inventor： 范海瑞 ,  刘新宇

IPC: C12M1/26 ,  C12M1/00

Abstract: 本实用新型涉及细胞采集技术领域，提供了一种猪用采集卵母细胞操作台，包括：取样筒，取样筒一端固定连通有取样口，取样口外壁套接有口吸管，一端呈敞开结构，取样筒敞开的一端卡接有盖板，盖板中心开设有通孔，取样筒内壁滑动连接有滑动块，滑动块侧壁固定连接有密封圈，滑动块背向取样口的一面固定连接有连接杆，连接杆远离滑动块的一端穿过盖板的通孔固定连接有挡板，连接杆侧壁设置有两组限位组件。该猪用采集卵母细胞操作台通过设置限位组件，在吸取卵母细胞后，连接杆外壁的限位块卡在盖板外壁，以防连接杆往回移动造成漏液，避免细胞污染，防止影响细胞质量。