公开(公告)号：CN114686449A

公开(公告)日：2022-07-01

申请号：CN202011623276.7

申请日：2020-12-31

Applicant: 复旦大学

Inventor： 邓强 ,  田青右 ,  朱园飞 ,  常豪 ,  谢幼华

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/867 ,  C12N15/65 ,  C12N15/36 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/02 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属生物技术及基因工程技术领域，涉及一种表达绿色荧光蛋白GFP分裂肽(split peptide)的重组人乙型肝炎病毒(rHBV/GFPc)复制子及其构建方法。本发明还公开了一种内含肽(intein)介导的GFP分裂肽高效拼接的方法。本发明中，在乙肝病毒(HBV)基因组核心蛋白(HBc)编码区删除部分序列，并插入增强绿色荧光蛋白EGFP碳端分裂肽C11(EGFPC11)编码序列，构建一种重组HBV(rHBV)复制子系统。rHBV/EGFPc11为一种缺陷病毒，能够在HBc互补条件下实现功能性复制，并表达EGFPC11，在细胞中能与超级折叠绿色荧光蛋白sfGFP氮端分裂肽(sfGFPN1‑10)，通过内含肽实现高效拼接，形成完整的功能性荧光蛋白。本发明能应用于HBV感染性细胞克隆的筛选，并能广泛用于HBV抗病毒药物的筛选和评价，具有重要的病毒学意义和应用前景。