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公开(公告)号：CN106519023A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201610410714.9
申请日：2016-06-03
Applicant: 哈尔滨工业大学(威海)
CPC classification number: C07K14/825 , C12N15/66 , C12N15/70 , C12P21/02
Abstract: 本发明提供了一种嗜冷酵母金属硫蛋白的基因克隆、表达方法及应用。通过提取该金属硫蛋白基因，设计引物F1、R1，经PCR扩增后与表达载体进行连接，构建重组表达载体；将重组表达载体转化入表达菌株，构建重组表达转化体；建立了该重组蛋白的表达与纯化方法。所述金属硫蛋白基因，其核苷酸序列及编码的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。本发明克隆获得的新型金属硫蛋白，含有16个半胱氨酸，丰富的巯基能够螯合多种金属重金属离子，在医药、食品保健及化妆品添加剂、基因工程试剂、化工、环保、动物、农业等领域前景广阔。
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公开(公告)号：CN102199645A
公开(公告)日：2011-09-28
申请号：CN201110063616.X
申请日：2011-03-09
Applicant: 哈尔滨工业大学(威海)
Abstract: 本发明属于生物制药领域，涉及嗜冷红酵母的发酵生产和所产金属硫蛋白的制备工艺。自极地嗜冷红酵母中选育出拮抗重金属、并产生金属硫蛋白的菌株，该菌在添加Cu2+的优化2216E培养液中，较低温度下培养，经细胞破壁、凝胶过滤、离子层析、脱盐和冷冻干燥得纯化的铜金属硫蛋白。该红酵母所产金属硫蛋白络合重金属离子的能力较强，并且产量为常温酵母的5-60倍。采用本发明提取金属硫蛋白纯度可达95％以上。酵母以其生物安全性高、易培养和不受时空限制而具有独特的优势，并且产生的金属硫蛋白提取工艺简单，无污染无残毒，较动物金属硫蛋白易得。在医药、食品保健及化妆品添加剂、基因工程试剂、化学、环保、动物、农业以及重金属回收等领域市场前景广阔。
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公开(公告)号：CN106566819B
公开(公告)日：2020-04-14
申请号：CN201610410715.3
申请日：2016-06-03
Applicant: 哈尔滨工业大学(威海)
Abstract: 本发明提供了一种低温嗜盐α—淀粉酶的基因克隆、表达及分离纯化方法。通过提取该金属硫蛋白基因，设计引物TAC‑F7、TAC‑R5，经PCR扩增后与表达载体进行连接，构建重组质粒；将重组质粒转化入表达菌株，构建重组基因工程菌；建立了该重组蛋白的表达与纯化方法。其低温嗜盐α—淀粉酶核苷酸序列及编码的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，其信号肽的基因和氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示。该淀粉酶具有如下性质：最适温度20℃，最适pH 8.0，最适盐浓度为1M NaCl；作为一种新型的低温嗜盐酶制剂，可有效的用于食品、发酵、医药、皮革、酿造、饲料、纺织和洗涤剂等工业中。
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公开(公告)号：CN106566819A
公开(公告)日：2017-04-19
申请号：CN201610410715.3
申请日：2016-06-03
Applicant: 哈尔滨工业大学(威海)
Abstract: 本发明提供了一种低温嗜盐α‑淀粉酶的基因克隆、表达及应用。通过提取该金属硫蛋白基因，设计引物TAC‑F7、TAC‑R5，经PCR扩增后与表达载体进行连接，构建重组质粒；将重组质粒转化入表达菌株，构建重组基因工程菌；建立了该重组蛋白的表达与纯化方法。该低温嗜盐α‑淀粉酶核苷酸序列及编码的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，其信号肽的基因和氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示。该淀粉酶具有如下性质：最适温度20℃，最适pH 8.0，最适盐浓度为1M NaCl；作为一种新型的低温嗜盐酶制剂，可有效的用于食品、发酵、医药、皮革、酿造、饲料、纺织和洗涤剂等工业中。
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