公开(公告)号：CN104046638A

公开(公告)日：2014-09-17

申请号：CN201410202095.5

申请日：2014-05-09

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 崔喜艳 ,  张治安 ,  陈展宇 ,  刘相国 ,  佟珊珊 ,  王阔 ,  范贝 ,  鹿丹 ,  刘明晓

IPC: C12N15/52 ,  C12N15/82 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种拟南芥AAP1基因的克隆及植物表达载体的构建方法，用TRIzol法提取拟南芥幼苗的总RNA，测定OD260/OD280比值，为2.014；将PCR产物进行凝胶回收，回收后的产物与PMD-18T载体进行连接，转化结束后进行质粒的提取，将提取的质粒进行PCR及酶切验证，经过质粒PCR验证，获得了1600bp的DNA条带；测序后发现该基因ORF1458bp，编码485个氨基酸的多肽，用限制性内切酶EcoR I和Xba I将目的基因和pCAMBIA3300载体分别酶切后，将目的基因定向连接到植物表达载体上，经转化结束后进行质粒的提取，将质粒进行PCR及酶切验证；质粒PCR验证，获得了一条为1600bp的DNA条带；经过酶切验证，分别获得了8300bp的pCAMBIA3300载体与为1600bp的目的片段；说明载体构建成功，重新命名为p3300-AAP1。