公开(公告)号：CN117126764A

公开(公告)日：2023-11-28

申请号：CN202310714730.7

申请日：2023-06-16

Applicant: 南昌大学第一附属医院

Inventor： 黎萍 ,  祝兰兰 ,  刘洋 ,  向天新 ,  罗宛莺 ,  彭婷秀 ,  何志勇 ,  罗帅 ,  廖文建 ,  张伟

IPC: C12N1/20 ,  C12N1/02 ,  C12N1/06 ,  C12R1/22

Abstract: 本发明涉及一种肺炎克雷伯菌外膜囊泡的提取方法，包括如下步骤：S1、单菌落摇菌过夜；S2、1：100接种培养肺炎克雷伯菌菌液，37℃摇床6‑8小时，监测菌液OD600nm达到1.0；S3、低速离心，回收上清：菌液以11000×g离心，4℃，20分钟，上清11000×g离心，4℃，20分钟离心一次；S4、中速离心，回收上清：上清13000×g离心，4℃，20分钟离心一次；S5、回收上清，用PVDF膜滤器进行过滤2次；S6、超高速离心粗提外膜囊泡：将过滤的上清转移到超离心管中，使用T70i rotor转子，150,000×g，4℃，1.5h，弃去上清；S7、密度梯度离心提纯外膜囊泡：超离管中加入不连续密度梯度OptiPrep，使用SW40 Tirotor转子，4°C，150000×g，16小时，弃去上清。本发明的方法实现了蔗糖垫超高速离心提取高纯度和高产量肺炎克雷伯菌OMVs。

公开(公告)号：CN119039406A

公开(公告)日：2024-11-29

申请号：CN202411186696.1

申请日：2024-08-28

Applicant: 南昌大学第一附属医院

Inventor： 黎萍 ,  高鹏翔 ,  向天新 ,  陆明 ,  刘洋 ,  廖文建 ,  祝兰兰 ,  张伟

IPC: C07K14/26 ,  C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C07K1/22 ,  C07K1/14 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种肺炎克雷伯菌铁载体蛋白fecA3的纯化方法，包括如下步骤，（1）fecA3重组载体转化；（2）fecA3蛋白诱导表达与检测；（3）取诱导后菌液1mL，离心收集菌体，与未诱导对照一同进行SDS‑PAGE分析，检测fecA3蛋白的表达；（4）Ni柱亲和层析纯化；（5）蛋白复性与浓缩；（6）纯化与复性后fecA3蛋白的鉴定；（7）质谱鉴定：利用LC‑MS/MS质谱技术对纯化的fecA3蛋白进行了鉴定。本发明解决了纯度差及产量低的问题，本发明通过截断一段肺炎克雷伯菌种属fecA3蛋白特有的信号肽的方案，大大降低fecA3蛋白的疏水性，成功的对肺炎克雷伯菌的fecA3蛋白进行纯化，并且质谱鉴定成功表达，且纯度达到99.7%，且分子量与预期相符。