公开(公告)号：CN1865430A

公开(公告)日：2006-11-22

申请号：CN200510013514.1

申请日：2005-05-16

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  侯建华 ,  方园园 ,  薄涛 ,  王翠艳 ,  杨少辉 ,  武志强 ,  闫瑞香

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/66 ,  C12N15/10 ,  C07H21/00 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种高产促胰岛素激素毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌及其构建方法。本发明运用分子生物学技术先构建毕赤酵母(P.pastoris)表达载体pPIC9GLP－1，然后将其线性化后转化进入毕赤酵母GS115中，从而获得能够高效分泌表达促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌，该工程菌的促胰岛素激素产量可达到100mg/L。同时，利用该高产工程菌生产的促胰岛素激素产品，其氨基酸序列不同于天然产品，且已被消除了胰蛋白酶切位点，因此不仅在体内不会被特异性的蛋白酶降解而能够长时间的保持活性，而且由于不会被胰蛋白酶降解，还可以制成口服制剂使用。

公开(公告)号：CN101824423A

公开(公告)日：2010-09-08

申请号：CN200910068036.2

申请日：2009-03-06

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  赵磊 ,  王翠艳 ,  丁东风 ,  王瑞菊 ,  陈苗

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/82 ,  C12N1/21 ,  A61K36/42 ,  A61P3/10 ,  C12R1/01

Abstract: 一种融合基因GAD-GLP-1和糖尿病食疗型黄瓜的培育方法。本发明提供的融合基因GAD-GLP-1如序列表所示，包含一段谷氨酸脱羧酶基因GAD和一段胰高血糖素样肽-1基因GLP-1，两个基因之间通过EcoRV位点进行连接，在EcoRV位点的两侧分别添加了两个赖氨酸，这四个氨基酸同时起到连接肽的作用。本发明将克隆载体pMD-GAD-GLP-1中的融合基因用BamHI和SalI酶切回收后连入Marker-free植物表达载体pX6中，构建得到无选择性标记的植物表达载体pX6-GAD-GLP-1，并转化到农杆菌LBA4404中构建成工程菌株。本发明通过农杆菌介导法，将GAD-GLP-1融合基因成功地转化到黄瓜自交系2M1，并获得了稳定表达GAD-GLP-1融合蛋白的转基因植株。糖尿病模型大鼠灌胃本发明提供的转基因黄瓜后，可以降低其血糖水平并改善其糖尿病症状。

公开(公告)号：CN100497591C

公开(公告)日：2009-06-10

申请号：CN200510013514.1

申请日：2005-05-16

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  侯建华 ,  方园园 ,  薄涛 ,  王翠艳 ,  杨少辉 ,  武志强 ,  闫瑞香

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/66 ,  C12N15/10 ,  C07K14/575 ,  C07H21/00 ,  C12R1/84 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明公开了一种高产促胰岛素激素毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌及其构建方法。本发明运用分子生物学技术先构建毕赤酵母(P.pastoris)表达载体pPIC9GLP-1，然后将其线性化后转化进入毕赤酵母GS115中，从而获得能够高效分泌表达促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌，该工程菌的促胰岛素激素产量可达到100mg/L。同时，利用该高产工程菌生产的促胰岛素激素产品，其氨基酸序列不同于天然产品，且已被消除了胰蛋白酶切位点，因此不仅在体内不会被特异性的蛋白酶降解而能够长时间的保持活性，而且由于不会被胰蛋白酶降解，还可以制成口服制剂使用。