公开(公告)号：CN100468041C

公开(公告)日：2009-03-11

申请号：CN200610015640.5

申请日：2006-09-14

Applicant: 南开大学

Inventor： 张琚 ,  石建党 ,  张立国 ,  杨睿 ,  符蓉 ,  杜小玲 ,  王克明 ,  徐勇 ,  强万明

IPC: G01N21/00 ,  G01N33/48 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明涉及一种检测人前列腺癌微小转移的试剂盒，公开了一种应用实时荧光定量RT-PCR技术检测人前列腺癌微小转移试剂盒的技术方案，主要涵概下列步骤：红细胞裂解法分离人外周血单个核细胞，Trizol试剂提取单个核细胞总RNA，用M-MLV反转录酶将单个核细胞RNA反转录为cDNA第一链，TaqMan探针法进行荧光实时定量RT-PCR的检测。本发明的有益效果：本方法采用了Taqman探针荧光实时定量RT-PCR技术，大大提高了PSA和PSMA mRNA检测的灵敏度和特异性，有效克服了常规RT-PCR扩增出现假阳性结果的缺点，其灵敏度可以达到检测107个单个核细胞中存在的一个前列腺细胞。本专利建立的检测方法、设计的引物、探针以及对临床样品的检测结果，为荧光实时定量PCR检测试剂盒的开发提供了可靠的依据。

公开(公告)号：CN1995969A

公开(公告)日：2007-07-11

申请号：CN200610015640.5

申请日：2006-09-14

Applicant: 南开大学

Inventor： 张琚 ,  石建党 ,  张立国 ,  杨睿 ,  符蓉 ,  杜小玲 ,  王克明 ,  徐勇 ,  强万明

IPC: G01N21/00 ,  G01N33/48 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明涉及一种检测人前列腺癌微小转移的试剂盒，公开了一种应用实时荧光定量RT－PCR技术检测人前列腺癌微小转移试剂盒的技术方案，主要涵概下列步骤：红细胞裂解法分离人外周血单个核细胞，Trizol试剂提取单个核细胞总RNA，用M－MLV反转录酶将单个核细胞RNA反转录为cDNA第一链，TaqMan探针法进行荧光实时定量RT－PCR的检测。本发明的有益效果：本方法采用了Taqman探针荧光实时定量RT－PCR技术，大大提高了PSA和PSMAmRNA检测的灵敏度和特异性，有效克服了常规RT－PCR扩增出现假阳性结果的缺点，其灵敏度可以达到检测107个单个核细胞中存在的一个前列腺细胞。本发明建立的检测方法、设计的引物、探针以及对临床样品的检测结果，为荧光实时定量PCR检测试剂盒的开发提供了可靠的依据。