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公开(公告)号：CN102147359A
公开(公告)日：2011-08-10
申请号：CN201110000246.5
申请日：2011-01-04
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种叶片组织自由基测定的原位显色和定量的方法，属于叶片自由基测定领域。其步骤为：第一步：采集植物新鲜叶片，快速漂洗干净；第二步：叶片自由基显色反应，1)超氧阴离子自由基：将叶片置于真空抽滤装置内，加入含SOD酶和MnCl2的溶液，抽真空，效果以叶片表面冒出明显气泡为宜；2）过氧化氢自由基：将叶片置于真空抽滤装置内，加入含抗坏血酸和mm过氧化氢酶的溶液，抽真空，效果以叶片表面冒出明显气泡为宜。第三步：脱除叶片叶绿素，清洗叶片并扫描成像用于软件分析定量。本发明能够直观地显示叶片组织中O2.-和H2O2的非均匀分布状况，可实现较为准确的半定量，成本低，操作简单，易推广。
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公开(公告)号：CN101638634B
公开(公告)日：2011-07-20
申请号：CN200910034261.4
申请日：2009-09-03
Applicant: 南京大学
IPC: C12N5/06
Abstract: 本发明公开了一种提取蚯蚓体腔细胞的溶液及超声方法，属于生物工程技术领域。提取蚯蚓体腔细胞的溶液，以每3mL计其中含有60-70mM NaCl、重量含量5％-6％ethanol、50-60mM guaicol glyceryl ether和5-6mM EGTA的PBS缓冲液。操作步骤：第一步，蚯蚓清肠，用PBS缓冲液反复清洗；第二步，将蚯蚓放入.冰冷提取体腔细胞的溶液中，迅速以超声进行提取；第三步，移去蚯蚓，加入LBBS缓冲液清洗，离心，去上清，所得沉淀为体腔细胞；第四步，加入细胞液孵育；第五步，台盼蓝染色、镜检，计算细胞存活率。本发明所提取的体腔细胞数量多，成活率高，能满足细胞凋亡以及单细胞凝胶电泳实验的需要，能用于对土壤污染进行早期诊断，实现早期预警的作用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101639454A
公开(公告)日：2010-02-03
申请号：CN200910034260.X
申请日：2009-09-03
Applicant: 南京大学
IPC: G01N24/10
Abstract: 本发明公开了一种测定蚯蚓体内羟基自由基的方法。首先将充分暴露的蚯蚓清肠，清洗，在密闭的已经除氧的密闭操作箱中进行自由基的PBN捕获，最后用EPR技术进行测定。本发明的优点在于：操作较为简单，容易掌握，并能在很短的时间内测得蚯蚓的羟基自由基；根据EPR谱图的超精细结构常数和谱图的形状分析，发现所测定的自由基是羟基自由基，是目前测定羟基自由基最直接、最准确有效的方法；具有较好的剂量效应关系。研究结果显示羟基自由基的强度与暴露物的浓度存在着较好的剂量-效应关系。
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公开(公告)号：CN102147359B
公开(公告)日：2013-04-10
申请号：CN201110000246.5
申请日：2011-01-04
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种叶片组织自由基测定的原位显色和定量的方法，属于叶片自由基测定领域。其步骤为：第一步：采集植物新鲜叶片，快速漂洗干净；第二步：叶片自由基显色反应，超氧阴离子自由基：将叶片置于真空抽滤装置内，加入含SOD酶和MnCl2的溶液，抽真空，效果以叶片表面冒出明显气泡为宜；2）过氧化氢自由基：将叶片置于真空抽滤装置内，加入含抗坏血酸和mM过氧化氢酶的溶液，抽真空，效果以叶片表面冒出明显气泡为宜。；第三步：脱除叶片叶绿素，清洗叶片并扫描成像用于软件分析定量。本发明能够直观地显示叶片组织中O2.-和H2O2的非均匀分布状况，，可实现较为准确的半定量，成本低，操作简单，易推广。
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公开(公告)号：CN101936930B
公开(公告)日：2012-01-11
申请号：CN201010250960.5
申请日：2010-08-11
Applicant: 南京大学
IPC: G01N24/10
Abstract: 本发明公开了一种测定苦草叶片中超氧阴离子自由基的方法，属于阴离子自由基的测定领域。首先采集充分暴露的苦草幼嫩叶片的尖端部位，清洗；在密闭的氮气环境中的密闭操作箱中进行自由基的Tiron捕获，最后用EPR技术进行测定。本发明的优点在于：操作较为简单，容易掌握，并能在很短的时间内测得苦草叶片的超氧阴离子自由基；根据EPR谱图的超精细结构常数和谱图的形状分析，结合SOD酶预处理后叶片自由基强度显著降低，发现所测定的自由基是超氧阴离子自由基，是目前测定超氧阴离子自由基最直接、最准确有效的方法；超氧阴离子对污染物响应敏感并具有较好的剂量效应关系；本发明同样适用于其它水生植物和陆生植物种属，并可适用于植物根部组织的自由基测定。
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公开(公告)号：CN101936930A
公开(公告)日：2011-01-05
申请号：CN201010250960.5
申请日：2010-08-11
Applicant: 南京大学
IPC: G01N24/10
Abstract: 本发明公开了一种测定苦草叶片中超氧阴离子自由基的方法，属于阴离子自由基的测定领域。首先采集充分暴露的苦草幼嫩叶片的尖端部位，清洗；在密闭的氮气环境中的密闭操作箱中进行自由基的Tiron捕获，最后用EPR技术进行测定。本发明的优点在于：操作较为简单，容易掌握，并能在很短的时间内测得苦草叶片的超氧阴离子自由基；根据EPR谱图的超精细结构常数和谱图的形状分析，结合SOD酶预处理后叶片自由基强度显著降低，发现所测定的自由基是超氧阴离子自由基，是目前测定超氧阴离子自由基最直接、最准确有效的方法；超氧阴离子对污染物响应敏感并具有较好的剂量效应关系；本发明同样适用于其它水生植物和陆生植物种属，并可适用于植物根部组织的自由基测定。
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公开(公告)号：CN101638634A
公开(公告)日：2010-02-03
申请号：CN200910034261.4
申请日：2009-09-03
Applicant: 南京大学
IPC: C12N5/06
Abstract: 发明公开了一种提取蚯蚓体腔细胞的溶液及超声方法，属于生物工程技术领域。提取蚯蚓体腔细胞的溶液，以每3mL计其中含有60-70mM NaCl、重量含量5％-6％ethanol、50-60mM guaicol glyceryl ether和5-6mM EGTA的PBS缓冲液。操作步骤：第一步，蚯蚓清肠，用PBS缓冲液反复清洗；第二步，将蚯蚓放入冰冷提取体腔细胞的溶液中，迅速以超声进行提取；第三步，移去蚯蚓，加入LBBS缓冲液清洗，离心，去上清，所得沉淀为体腔细胞；第四步，加入细胞液孵育；第五步，台盼蓝染色、镜检，计算细胞存活率。本发明所提取的体腔细胞数量多，成活率高，能满足细胞凋亡以及单细胞凝胶电泳实验的需要，能用于对土壤污染进行早期诊断，实现早期预警的作用。
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