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公开(公告)号：CN106520864A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201610864319.8
申请日：2016-09-28
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开一种酶法合成唾液酸类似物的方法及其应用，用唾液酸醛缩酶催化含有醛基的底物和含有羰基的底物发生缩合反应，得到唾液酸类似物。合成的唾液酸类似物可以作为潜在的神经氨酸酶抑制剂或作为潜在神经氨酸酶抑制剂的模板，为更多神经氨酸酶抑制剂的合成提供基础。本技术方案可以通过醛缩酶催化含有醛基的底物和含有羰基的底物缩合得到唾液酸类似物，这些类似物以5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-D-甘油-D-半乳壬酮糖(5-acetamido-3,5-dideoxy-D-glycero-D-galactonulosonic acid,Neu5Ac)或2-酮基-3-脱氧-D-甘油-D-半乳壬酮糖(2-keto-3-deoxy-D-glycero-D-galactonononic acid，KDN)结构为基础或与其互为手性异构体，具备很好的作为神经氨酸酶抑制剂的潜能。
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公开(公告)号：CN105622761B
公开(公告)日：2019-10-25
申请号：CN201610082115.9
申请日：2016-02-05
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物工程领域，公开了一种凝集素蛋白寡聚复合体的构建方法及其应用，将至少两个凝集素蛋白单体的核酸序列克隆并串联连接至蛋白表达载体的多克隆位点中构建凝集素蛋白寡聚复合体的重组表达载体，由所述重组表达载体进行表达获得凝集素蛋白寡聚复合体。本发明核心内容是将凝集素蛋白单体通过分子生物学和基因工程技术改造成为凝集素蛋白寡聚复合体。本发明通过凝血实验效果检测证明：所述凝集素蛋白寡聚复合体和原单体蛋白相比具有显著增强的凝血活性，且其效果随复合体中单体数目的增加而增加，表明所述各凝集素蛋白寡聚复合体具有更强的结合糖链的能力。本发明利用基因工程手段克隆构建并表达了凝集素蛋白寡聚复合体，实现了各凝集素蛋白寡聚复合体的大量重组表达。
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公开(公告)号：CN105505906A
公开(公告)日：2016-04-20
申请号：CN201610031649.9
申请日：2016-01-18
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12N9/80 , C12N2800/101
Abstract: 本发明公开了一种定点突变改造的N-糖酰胺酶D及其制备方法和应用，该定点突变改造的N-糖酰胺酶D是由氨基酸序列为SEQ ID NO.1的野生型N-糖酰胺酶D在102位或236位氨基酸定点突变而产生的。突变后的酶不具有酶解N-链寡糖的能力，但其可以特异性的识别糖蛋白，从而达到分离纯化糖蛋白的目的。
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公开(公告)号：CN105602923B
公开(公告)日：2019-03-12
申请号：CN201610032842.4
申请日：2016-01-18
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物工程领域，公开一种N‑糖酰胺酶D的异源表达及其应用。N‑糖酰胺酶D在酶解糖蛋白上的N‑链寡糖中的应用，所述N‑糖酰胺酶D的氨基酸序列如SEQ NO.1所示。本发明通过酶活性测定和底物特异性的分析，发现所述N‑糖酰胺酶D能作用于糖蛋白和糖肽，并最大限度酶切不同类型的N‑糖链结构，无自身糖基化污染，兼具了PNGase F和PNGase A两者优点的同时摒弃了它们的缺点。本发明利用基因工程手段克隆表达了重组N‑糖酰胺酶D，实现了N‑糖酰胺酶D的大量表达，获得了N‑糖酰胺酶D。
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公开(公告)号：CN105622761A
公开(公告)日：2016-06-01
申请号：CN201610082115.9
申请日：2016-02-05
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物工程领域，公开了一种凝集素蛋白寡聚复合体的构建方法及其应用，将至少两个凝集素蛋白单体的核酸序列克隆并串联连接至蛋白表达载体的多克隆位点中构建凝集素蛋白寡聚复合体的重组表达载体，由所述重组表达载体进行表达获得凝集素蛋白寡聚复合体。本发明核心内容是将凝集素蛋白单体通过分子生物学和基因工程技术改造成为凝集素蛋白寡聚复合体。本发明通过凝血实验效果检测证明：所述凝集素蛋白寡聚复合体和原单体蛋白相比具有显著增强的凝血活性，且其效果随复合体中单体数目的增加而增加，表明所述各凝集素蛋白寡聚复合体具有更强的结合糖链的能力。本发明利用基因工程手段克隆构建并表达了凝集素蛋白寡聚复合体，实现了各凝集素蛋白寡聚复合体的大量重组表达。
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公开(公告)号：CN105602923A
公开(公告)日：2016-05-25
申请号：CN201610032842.4
申请日：2016-01-18
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12N9/80 , C12N15/70 , C12N2800/101 , C12P19/00 , C12P21/00
Abstract: 本发明属于生物工程领域，一种新型优质N-糖酰胺酶D的异源表达及其应用。N-糖酰胺酶D在酶解糖蛋白上的N-链寡糖中的应用，所述N-糖酰胺酶D的氨基酸序列如SEQNO.1所示。本发明通过酶活性测定和底物特异性的分析，发现所述N-糖酰胺酶D能作用于糖蛋白和糖肽，并最大限度酶切不同类型的N-糖链结构，无自身糖基化污染，兼具了PNGase F和PNGase A两者优点的同时摒弃了它们的缺点。本发明利用基因工程手段克隆表达了重组N-糖酰胺酶D，实现了N-糖酰胺酶D的大量表达，获得了优质的N-糖酰胺酶D。
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