公开(公告)号：CN117327156A

公开(公告)日：2024-01-02

申请号：CN202311167506.7

申请日：2023-09-12

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 辛志宏 ,  吴国俊 ,  王梦溪 ,  殷晨悦

IPC: C07K7/56 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  A61P31/04 ,  A61P31/10 ,  C12R1/125 ,  A61K38/00

Abstract: 本发明涉及一种新型抗菌肽的生产与应用技术，属于基因工程领域。以Bacillus subtilis 1A751Δpps为出发菌株，构建了不产生环脂肽的底盘工程菌株B.subtilis 1A751 WR。采用转化偶联重组(TAR)技术定向克隆并异源表达iturin生物合成基因簇，构建单产iturin菌株。通过CRISPR/Cas9技术，用群体感应动态启动子替换iturin天然静态启动子，所得菌株可产生4种新的C10‑C产量进一步增加13iturins，结合CRISPRi到16.7g技术抑制·L‑1，是野生AprE型菌株和NprEHYM基因‑，12使的iturin53.66倍，也是迄今为止iturin产量最高的菌株。该菌株对致病细菌和丝状病原真菌都具有强的抑制作用，半数有效抑菌浓度(IC50)为40‑60μg·mL‑1。该发明实现iturin生物合成的动态“上调和下调”，是提高脂肽产量的有效方法，可扩展到其他生物活性分子的生产调节。

公开(公告)号：CN118581112A

公开(公告)日：2024-09-03

申请号：CN202410640199.8

申请日：2024-05-22

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 辛志宏 ,  王梦溪 ,  郑杰 ,  殷晨悦 ,  李文庆

IPC: C12N15/31 ,  C07K14/32 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12P21/02 ,  C07K7/64 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明发现一种枯草芽孢杆菌外排泵膜蛋白YoeA，具有将枯草芽孢杆菌抗菌脂肽plipastatin外排至细胞外的功能，降低plipastatin对细胞生长的自抑制作用，促进细胞生长，增加抗菌脂肽plipastatin的产量。通过对plipastatin基因簇上下游进行生物信息学分析，在基因簇上游2767碱基对发现一个假定的编码Na+驱动转运蛋白yoeA基因，该基因与炭疽芽孢杆菌中的多药及毒性化合物外排蛋白(META)YoeA具有70.84％的同源性。采用增加拷贝数的方式过表达该基因，将plipastatin的产量提高至出发菌株的2.84倍，而利用CRISPR/Cas9技术敲除yoeA基因后，plipastatin产量下降70％；将该基因通过游离质粒回补至敲除yoeA基因的菌株中，plipastatin的产量得以恢复。这一结果证实了YoeA转运蛋白在提升枯草芽孢杆菌plipastatin产量中发挥重要作用，为工业化生产plipastatin提供了技术支持。