公开(公告)号：CN102533762A

公开(公告)日：2012-07-04

申请号：CN201110437753.5

申请日：2011-12-23

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 朱月林 ,  盖钧镒 ,  刘思辰 ,  杨立飞

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/84 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10 ,  A01H5/00

Abstract: 本发明属于分子生物学与生物技术领域，涉及一种获得脱致敏转基因大豆新材料的方法。该方法是将大豆Gly m Bd 30K基因RNA干扰表达载体pCAMBIA3301-30K-RNAi通过农杆菌介导的方法导入大豆；所述的大豆Gly m Bd 30K基因RNA干扰表达载体pCAMBIA3301-30K-RNAi是将序列为SEQ ID NO.2的Gly m Bd 30K基因的发卡结构插入到载体pCAMBIA3301的PmI I和BstEII位点得到。本发明获得的脱致敏转基因大豆籽粒中过敏蛋白Gly m Bd 30K基因的表达量明显降低，同时转化株具有除草剂抗性。

公开(公告)号：CN101921804A

公开(公告)日：2010-12-22

申请号：CN201010198445.7

申请日：2010-06-11

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 朱月林 ,  盖钧镒 ,  刘思辰 ,  杨立飞

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/113 ,  A01H5/00

Abstract: 本发明涉及大豆过敏蛋白质基因Gly m Bd 30 K的RNAi植物表达载体的构建，属于分子生物学领域。分别设计引物扩增Gly m Bd 30 K干扰片段和内含子片段连接pMD19-T载体，转化TOP10。在两端引入酶切位点，将三个片段[30k-antisense(A)、intron(I)和30k-sense(S)]连接起来，将A-I-S结构连入pCAMBIA1301形成干扰载体pCAScil-1301。该RNAi植物表达载体转化大豆将会对过敏蛋白质基因进行基因沉默，为确保过敏人群安全食用大豆奠定坚实基础。对提高我国大豆分子育种的技术水平具有重要理论和实践意义。

公开(公告)号：CN101906432A

公开(公告)日：2010-12-08

申请号：CN201010224777.8

申请日：2010-07-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 朱月林 ,  盖钧镒 ,  刘思辰 ,  杨立飞

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/113 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00

Abstract: 本发明涉及大豆过敏蛋白质基因Gly m Bd 28K的RNAi植物表达载体的构建，属于分子生物学领域。分别改造植物载体pBI121和pCAMBIA3301，并连接得到新载体pGSB。PCR扩增CHAS内含子片段，并用其替换载体pGSB中GUS序列，分别设计引物扩增Gly mBd 28K正义和反义干扰片段，并将其分别引入载体pGSBI，得到Gly m Bd 28K的RNAi植物表达载体pYZ。Gly m Bd 28K是大豆主要过敏蛋白质之一，该RNAi植物表达载体转化大豆将会对过敏蛋白质基因进行基因沉默，为确保过敏人群食用大豆安全奠定坚实基础。对提高我国大豆分子育种的技术水平具有重要理论和实践意义。

公开(公告)号：CN102533762B

公开(公告)日：2014-12-03

申请号：CN201110437753.5

申请日：2011-12-23

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 朱月林 ,  盖钧镒 ,  刘思辰 ,  杨立飞

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/84 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10 ,  A01H5/00

Abstract: 本发明属于分子生物学与生物技术领域，涉及一种获得脱致敏转基因大豆新材料的方法。该方法是将大豆Gly m Bd 30K基因RNA干扰表达载体pCAMBIA3301-30K-RNAi通过农杆菌介导的方法导入大豆；所述的大豆Gly m Bd 30K基因RNA干扰表达载体pCAMBIA3301-30K-RNAi是将序列为SEQ ID NO.2的Gly m Bd 30K基因的发卡结构插入到载体pCAMBIA3301的PmI I和BstEII位点得到。本发明获得的脱致敏转基因大豆籽粒中过敏蛋白Gly m Bd 30K基因的表达量明显降低，同时转化株具有除草剂抗性。