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公开(公告)号:CN107290395A
公开(公告)日:2017-10-24
申请号:CN201710427350.X
申请日:2017-06-08
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种百合耐寒评价及耐寒品种筛选的方法及应用,属于农业高效生产技术。该方法以百合植株生长点以下第二轮第一片成熟叶为材料,将成熟叶剪切成一定大小叶块,并对叶块进行预处理。之后,利用低温循环仪对叶块进行处理,然后测定相对电导率。最后,利用统计软件计算出各百合品种的半致死温度(LT50),根据半致死温度对百合品种耐寒性进行评价,并筛选出耐寒性百合品种。与传统的以百合种球或组培苗为材料的耐寒评价方法相比,本方法对百合耐寒性评价结果更能反应百合田间的实际耐寒性,比传统方法更具代表性。
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公开(公告)号:CN107182506A
公开(公告)日:2017-09-22
申请号:CN201710428252.8
申请日:2017-06-08
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01G1/00
Abstract: 本发明公开了一种提高菊花商品率及产量的方法和应用,属于农业高效生产技术。包括以下步骤:(1)从菊花母株上取插穗,将插穗放入生根剂溶液和杀菌剂溶液中浸泡;(2)将浸泡后的插穗扦插入育苗基质中;(3)对大棚土壤进行整地浅耕,去除杂草,并铺上定制网,定植前一天傍晚,浇透土壤;(4)将生长状态一致,根系健壮的扦插苗定植到塑料大棚中,定植密度为165~110株·m‑2,统一常规田间管理,直到采收。本发明方法有助于显著提高菊花商品率、产量和菊花生产效益,为切花菊新品种的推广提供了重要的理论和技术指导。
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公开(公告)号:CN103115811A
公开(公告)日:2013-05-22
申请号:CN201310081002.3
申请日:2013-03-14
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N1/28
Abstract: 本发明公开了一种黄瓜减数分裂粗线期染色体制片的方法,它是取黄瓜盛花期植株上的花蕾,放入体积比为3∶1的E∶G(乙醇∶冰醋酸)固定液中固定,剥开花蕾,取处于减数分裂粗线期的花药用纤维素酶和果胶酶进行酶解,取酶解好的一个花药在适量E∶G固定液中捣碎,吸取悬浮液涂片,然后用火焰干燥法制片。本发明采用涂片后再火焰干燥的方法,不仅可以制得分散度高,形态好的粗线期染色体,而且提高了黄瓜花药的利用率;更重要的是,其所得的粗线期染色体制片可直接用于荧光原位杂交,为黄瓜的细胞学研究提供了可靠的保证。
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公开(公告)号:CN104419763B
公开(公告)日:2017-01-18
申请号:CN201310409784.9
申请日:2013-09-11
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了黄瓜单拷贝基因在染色体上物理定位的方法,它是通过PCR扩增获得黄瓜单拷贝基因,然后对产物进行凝胶电泳回收纯化,以纯化产物为模板进行第二次PCR扩增,然后将第二次PCR产物标备探针。分别取黄瓜根尖和盛花期植株上的花蕾进行酶解,涂片法制片,挑选分散度高的片子,并进一步进行胃蛋白酶处理后,备用。最后将标好的探针杂交到处理好的载玻片上,在荧光显微镜下观察信号。本发明采用PCR扩增后切胶回收,之后再进行二次PCR扩增的方法,不仅可以去除基因组DNA的干扰,而且解决了切胶回收率低的问题;另外涂片法结合胃蛋白酶处理制作背景清晰且分散度高的片子可以提高信号的分辨率;通过此方法,可在染色体上直接检测到的最短长度为2kb的单拷贝基因,为黄瓜的细胞遗传学研究提供了可靠的保证。
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公开(公告)号:CN104419763A
公开(公告)日:2015-03-18
申请号:CN201310409784.9
申请日:2013-09-11
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6841 , C12Q2543/10 , C12Q2531/113
Abstract: 本发明公开了黄瓜单拷贝基因在染色体上物理定位的方法,它是通过PCR扩增获得黄瓜单拷贝基因,然后对产物进行凝胶电泳回收纯化,以纯化产物为模板进行第二次PCR扩增,然后将第二次PCR产物标备探针。分别取黄瓜根尖和盛花期植株上的花蕾进行酶解,涂片法制片,挑选分散度高的片子,并进一步进行胃蛋白酶处理后,备用。最后将标好的探针杂交到处理好的载玻片上,在荧光显微镜下观察信号。本发明采用PCR扩增后切胶回收,之后再进行二次PCR扩增的方法,不仅可以去除基因组DNA的干扰,而且解决了切胶回收率低的问题;另外涂片法结合胃蛋白酶处理制作背景清晰且分散度高的片子可以提高信号的分辨率;通过此方法,可在染色体上直接检测到的最短长度为2kb的单拷贝基因,为黄瓜的细胞遗传学研究提供了可靠的保证。
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公开(公告)号:CN103114151A
公开(公告)日:2013-05-22
申请号:CN201310081001.9
申请日:2013-03-14
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种荧光原位杂交的方法,以黄瓜减数分裂粗线期染色体为靶DNA进行多探针的荧光原位杂交。精选染色体分散良好且形态结构清晰的高质量制片,在80℃的70%去离子甲酰胺中变性,梯度酒精中脱水干燥;采用碱裂解法提取目标质粒DNA,利用缺刻平移法进行标记,配制杂交混合液,90℃变性后,加到载玻片上使靶DNA与探针进行杂交,最后进行信号检测。本发明的荧光原位杂交技术,可用于黄瓜染色体物理图谱的绘制,由于其一次性可加入多个探针,避免了对一张制片多次重复杂交,大大提高了实验效率。本发明在配置杂交混合液的过程中加入了适量的黄瓜全基因组DNA和Cot-1DNA,用于封阻杂信号和重复序列信号,提高了靶信号的辨识率,增加了实验结果的准确性。
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公开(公告)号:CN117247948A
公开(公告)日:2023-12-19
申请号:CN202311111276.2
申请日:2023-08-31
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/29 , C12N15/84 , C07K14/415 , A01H5/02 , A01H6/14
Abstract: 本发明公开了一种CmD53基因及其突变体的克隆、表达和应用,本发明中CmD53基因的cDNA序列如SEQ ID No:1所示;CmD53基因突变体(CmD53m)的cDNA序列如SEQ ID No:2所示。克隆CmD53基因及其突变体后重组构建了pORE‑R4‑Cm D53和pORE‑R4‑CmD53m植物表达载体,利用表达载体在菊花细胞内过表达CmD53蛋白或抗降解的CmD53同工蛋白,进而调控菊花花期。本发明克隆菊花CmD53基因并构建CmD53和CmD53m的植物表达载体,采用农杆菌介导法将其导入植株,探索其对菊花花期的影响和新的策略,为菊花花期改良工程育种提供优异基因储备。
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公开(公告)号:CN117143885A
公开(公告)日:2023-12-01
申请号:CN202311111280.9
申请日:2023-08-31
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种CmD14.1基因及其沉默序列的克隆、表达和应用,所述CmD14.1基因具有如SEQ ID No:1所示的序列,以菊花‘神马’为材料克隆获得基因CmD14.1,构建植物超表达载体;利用amiRNAi技术构建CmD14.1基因沉默载体并导入菊花‘神马’。花期观察结果显示CmD14.1基因沉默植株开花时间明显推迟,而外源SL类似物rac‑GR24及其合成抑制剂TIS108处理CmD14.1基因沉默植株花期无明显变化;CmD14.1超表达植株在没有GR24处理下花期无明显变化,但GR24处理后比野生型植株开花时间更早。本发明为菊花花期改良分子育种提供优异基因储备和新的策略。
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