公开(公告)号：CN109628487A

公开(公告)日：2019-04-16

申请号：CN201811571140.9

申请日：2018-12-21

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 吴珍芳 ,  曾芳 ,  廖莎 ,  李紫聪 ,  朱庆春

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/877 ,  A01K67/027 ,  C07K14/48

CPC classification number: C12N15/8509 ,  A01K67/0278 ,  A01K2207/15 ,  A01K2217/072 ,  A01K2227/108 ,  A01K2267/01 ,  C07K14/48 ,  C12N15/8778 ,  C12N2800/107

Abstract: 本发明通过转基因方法制备能在腮腺中特异表达人源NGF的转基因猪，并采集该转基因猪分泌的唾液，分离纯化人源NGF用于人类疾病的治疗，尤其是人类神经性疾病的治疗，有显著效果。且目前市场上已开发并投入临床使用的NGF药物为鼠源性的NGF，存在小鼠唾液量少且内源NGF分泌量少，分离纯化量少的原因，导致市场价格高昂；同时，鼠源NGF虽然与人源同源性高，但鼠源NGF仍然可能存在免疫原性问题，引起过敏等不良反应。因此本专利发明的方法，得到的转基因猪唾液中高效高产的表达人源NGF蛋白，既解决了鼠源NGF产量低的问题，又解决了同源性问题。

公开(公告)号：CN111500641A

公开(公告)日：2020-08-07

申请号：CN202010402846.3

申请日：2020-05-13

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 吴珍芳 ,  李紫聪 ,  邝哲 ,  曾芳 ,  廖莎 ,  朱庆春 ,  蔡更元 ,  郑恩琴 ,  杨化强 ,  杨杰 ,  洪林君 ,  顾婷 ,  徐铮 ,  黄思秀

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/877 ,  C12N15/85 ,  A01K67/027 ,  C07K14/48

Abstract: 本发明公开了一种转人神经生长因子基因猪的制备方法。该方法包括如下步骤：a、构建靶向pNGF基因外显子的CRISPR/Cas9系统表达载体；b、构建提供hNGF基因的同源重组载体；c、将CRISPR/Cas9系统表达载体与hNGF基因的同源重组载体共转染猪耳成纤维细胞；d、转染后的猪耳成纤维细胞经筛选后，获得阳性细胞系，并通过体细胞克隆获得转人神经生长因子的转基因猪。本发明通过定点基因重组的方式，将hNGF基因插入猪pNGF基因位点，从而获得的转人神经生长因子基因猪，可以表达人神经生长因子而不表达猪神经生长因子，避免了在猪唾液中收集人源NGF时，其中还混有猪源NGF的现状，也避免其在用作药物治疗时的免疫原性问题，更加安全和有效。