公开(公告)号：CN118256551B

公开(公告)日：2024-11-15

申请号：CN202311295558.2

申请日：2023-10-09

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 王厚领 ,  夏新莉 ,  尹伟伦 ,  刘晓 ,  任淑宁 ,  祝晨雨

IPC: C12N15/84 ,  C12N15/29 ,  A01H5/00 ,  A01H6/00

Abstract: 本发明属于植物基因工程领域，公开了一种在三倍体毛白杨中开展高效基因编辑的方法。包括如下步骤：1)通过分析基因组结构特点，设计精准的gRNA，合成引物；2)利用BsaI酶，再通过无缝克隆的方法将靶向目标基因的gRNA构建到基因编辑载体上；3)原生质体中进行基因编辑效率的验证；4)高效遗传转化和基因编辑，具体包括如下步骤：准备遗传转化的植株；将构建好的载体转化到农杆菌EHA105中；制备侵染重悬液：重悬液中加入石墨烯溶液；侵染三倍体毛白杨；侵染叶片和农杆菌的共同培养；抗性愈伤筛选；抗性芽的诱导、伸长、生根培养；5)利用分子检测技术对基因编辑效率进行检测。本发明建立了高效基因编辑技术体系。

公开(公告)号：CN118256551A

公开(公告)日：2024-06-28

申请号：CN202311295558.2

申请日：2023-10-09

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 王厚领 ,  夏新莉 ,  尹伟伦 ,  刘晓 ,  任淑宁 ,  祝晨雨

IPC: C12N15/84 ,  C12N15/29 ,  A01H5/00 ,  A01H6/00

Abstract: 本发明属于植物基因工程领域，公开了一种在三倍体毛白杨中开展高效基因编辑的方法。包括如下步骤：1)通过分析基因组结构特点，设计精准的gRNA，合成引物；2)利用BsaI酶，再通过无缝克隆的方法将靶向目标基因的gRNA构建到基因编辑载体上；3)原生质体中进行基因编辑效率的验证；4)高效遗传转化和基因编辑，具体包括如下步骤：准备遗传转化的植株；将构建好的载体转化到农杆菌EHA105中；制备侵染重悬液：重悬液中加入石墨烯溶液；侵染三倍体毛白杨；侵染叶片和农杆菌的共同培养；抗性愈伤筛选；抗性芽的诱导、伸长、生根培养；5)利用分子检测技术对基因编辑效率进行检测。本发明建立了高效基因编辑技术体系。