公开(公告)号：CN116926121B

公开(公告)日：2024-01-26

申请号：CN202311205212.9

申请日：2023-09-19

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 李凡 ,  何鹏 ,  兰平秀 ,  谭冠林 ,  陈小姣 ,  罗恒明

IPC: C12N15/84 ,  C12N15/65 ,  C12N15/64 ,  C12N15/40 ,  C12N1/21 ,  C12R1/94 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明涉及一种带有GFP基因的重楼花叶坏死病毒侵染性克隆载体及其构建方法，属于植物病毒学和基因工程领域。本发明中带GFP基因的重楼花叶坏死病毒侵染性克隆载体，是利用酵母重组的方法，将PMNV全基因组RNA对应的cDNA全长序列克隆至pCB301‑HDV‑2µ载体的双35S启动子和终止子NOS之间，并把绿色荧光蛋白报告基因插入到PMNV的NIb蛋白和CP蛋白之间，即获得pCB301‑PMNV‑GFP重组载体。本发明利用酵母同源重组技术构建的PMNV侵染性克隆载体是重楼(56)对比文件杨林毅;陈潞;陈泽历;飞进强;王喆;徐绍忠;赵明富;文国松.滇重楼辣椒轻斑驳病毒分离物的鉴定及全基因组序列分析.湖北农业科学.2020,(13),第.张润;王连春;陈海如;李凡.烟草丛顶病毒编码的沉默抑制子初步鉴定.云南农业大学学报(自然科学版).2011,(06),第154-157+162页.

公开(公告)号：CN116926121A

公开(公告)日：2023-10-24

申请号：CN202311205212.9

申请日：2023-09-19

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 李凡 ,  何鹏 ,  兰平秀 ,  谭冠林 ,  陈小姣 ,  罗恒明

IPC: C12N15/84 ,  C12N15/65 ,  C12N15/64 ,  C12N15/40 ,  C12N1/21 ,  C12R1/94 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明涉及一种带有GFP基因的重楼花叶坏死病毒侵染性克隆载体及其构建方法，属于植物病毒学和基因工程领域。本发明中带GFP基因的重楼花叶坏死病毒侵染性克隆载体，是利用酵母重组的方法，将PMNV全基因组RNA对应的cDNA全长序列克隆至pCB301‑HDV‑2µ载体的双35S启动子和终止子NOS之间，并把绿色荧光蛋白报告基因插入到PMNV的NIb蛋白和CP蛋白之间，即获得pCB301‑PMNV‑GFP重组载体。本发明利用酵母同源重组技术构建的PMNV侵染性克隆载体是重楼上植物病毒的第一个侵染性克隆，本发明中构建的pCB301‑PMNV‑GFP载体能稳定高效系统侵染模式植物本生烟，并在本生烟体内高效表达GFP。