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公开(公告)号：CN101993888B
公开(公告)日：2012-06-13
申请号：CN200910091766.4
申请日：2009-08-25
Applicant: 中国医学科学院北京协和医院
Abstract: 本发明提供一种在酵母系统中诱导表达重组葎草花粉主要致敏蛋白Hum j 3的方法，包括：构建表达SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的重组表达载体；线性化重组表达载体，转化感受态酵母细胞；筛选阳性克隆，得重组菌株，并扩大培养；重组菌株的诱导表达以及筛选：Hum j 3蛋白在酵母中以α-factor信号肽蛋白引导的分泌表达；以高活性的重组菌株为种子菌进行高密度的诱导表达重组Hum j 3蛋白；收集培养上清并分离纯化Humj 3。本发明首次在国际上确证了葎草主要致敏蛋白的全基因序列，并首次成功进行了酵母分泌表达，且证实了该重组蛋白具有免疫活性，为葎草花粉过敏患者的分子诊断和临床免疫治疗提供了全新的蛋白。
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公开(公告)号：CN101392023B
公开(公告)日：2011-05-18
申请号：CN200710122176.4
申请日：2007-09-21
Applicant: 中国医学科学院北京协和医院
IPC: C07K14/415 , C07K16/18
Abstract: 本发明公开了葎草花粉主要致敏蛋白，该蛋白可从葎草花粉中分离获得，其能与89％以上葎草花粉过敏病人血清特异性IgE结合，经SDS-PAGE测定其表观分子量约为12kDa，等电点为4.7，N端序列为：NH4+-MDNPFENGMKA-COO-。该蛋白的分离纯化为其变应原制剂标准化的实现奠定了基础。
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公开(公告)号：CN101993888A
公开(公告)日：2011-03-30
申请号：CN200910091766.4
申请日：2009-08-25
Applicant: 中国医学科学院北京协和医院
Abstract: 本发明提供一种在酵母系统中诱导表达重组葎草花粉主要致敏蛋白Hum j 3的方法，包括：构建表达SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的重组表达载体；线性化重组表达载体，转化感受态酵母细胞；筛选阳性克隆，得重组菌株，并扩大培养；重组菌株的诱导表达以及筛选：Hum j 3蛋白在酵母中以α-factor信号肽蛋白引导的分泌表达；以高活性的重组菌株为种子菌进行高密度的诱导表达重组Humj 3蛋白；收集培养上清并分离纯化Humj 3。本发明首次在国际上确证了葎草主要致敏蛋白的全基因序列，并首次成功进行了酵母分泌表达，且证实了该重组蛋白具有免疫活性，为葎草花粉过敏患者的分子诊断和临床免疫治疗提供了全新的蛋白。
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公开(公告)号：CN101988928A
公开(公告)日：2011-03-23
申请号：CN200910090769.6
申请日：2009-08-06
Applicant: 中国医学科学院北京协和医院
IPC: G01N33/68 , G01N33/577 , G01N33/543
Abstract: 本发明提供一种用于Hum j3检测的夹心ELISA试剂盒，其通过天然葎草花粉纯化主要致敏蛋白Hum j3的制备、小鼠杂交瘤单抗的制备和筛选、夹心ELISA方法两种单抗的选择、夹心ELISA方法试验条件的确定、夹心ELISA方法敏感性、特异性、线性范围、稳定性等方法学指标的确定等步骤建立夹心ELISA法。本发明试剂盒包括该方法的运用包括：捕捉抗体和检测抗体，所述捕捉抗体包被于酶标板中，所述检测抗体为酶标记抗体，所述捕捉抗体和检测抗体分别特异性地针对Hum j3的不同抗原决定簇。本发明在临床实践、变应原制药工业生产、质控与新药研发、气候与环境中Hum j3含量监测与预报中有重要的运用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101392023A
公开(公告)日：2009-03-25
申请号：CN200710122176.4
申请日：2007-09-21
Applicant: 中国医学科学院北京协和医院
IPC: C07K14/415 , C07K16/18
Abstract: 本发明公开了葎草花粉主要致敏蛋白，该蛋白可从葎草花粉中分离获得，其能与89％以上葎草花粉过敏病人血清特异性IgE结合，经SDS－PAGE测定其表观分子量约为12kDa，等电点为4.7，N端序列为：NH4+－MDNPFENGMKA－COO－。该蛋白的分离纯化为其变应原制剂标准化的实现奠定了基础。
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公开(公告)号：CN101392022B
公开(公告)日：2011-11-30
申请号：CN200710122175.X
申请日：2007-09-21
Applicant: 中国医学科学院北京协和医院
IPC: C07K14/415 , C07K16/18
Abstract: 本发明提供了葎草花粉主要致敏蛋白单克隆抗体，其是以葎草花粉主要致敏蛋白作为免疫原制备获得。所述葎草花粉主要致敏蛋白可从葎草花粉中分离获得，能与89％以上葎草花粉过敏病人血清特异性IgE结合，经SDS-PAGE测定其表观分子量约为12kDa，等电点为4.7，N端序列为：NH4+-MDNPFENGMKA-COO-。其可用于葎草花粉变应原制剂中主要致敏蛋白的定量标示。
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公开(公告)号：CN101392017A
公开(公告)日：2009-03-25
申请号：CN200710122177.9
申请日：2007-09-21
Applicant: 中国医学科学院北京协和医院
Abstract: 本发明提供了葎草花粉主要致敏蛋白的分离纯化方法，本发明以葎草花粉为原料，将其制备成粗提液，再经凝胶分子排阻层析和强阴离子交换层析，即得到主要致敏蛋白。该蛋白能与89％以上葎草花粉过敏病人血清特异性IgE(sIgE)结合，经SDS－PAGE测定其表观分子量约为12kDa，等电点为4.7，N端序列为：NH4+－MDNPFENGMKA－COO－。该蛋白的分离纯化为其变应原制剂标准化的实现奠定了基础。
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公开(公告)号：CN101392017B
公开(公告)日：2011-12-07
申请号：CN200710122177.9
申请日：2007-09-21
Applicant: 中国医学科学院北京协和医院
Abstract: 本发明提供了葎草花粉主要致敏蛋白的分离纯化方法，本发明以葎草花粉为原料，将其制备成粗提液，再经凝胶分子排阻层析和强阴离子交换层析，即得到主要致敏蛋白。该蛋白能与89％以上葎草花粉过敏病人血清特异性IgE(sIgE)结合，经SDS-PAGE测定其表观分子量约为12kDa，等电点为4.7，N端序列为：NH4+-MDNPFENGMKA-COO-。该蛋白的分离纯化为其变应原制剂标准化的实现奠定了基础。
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公开(公告)号：CN101392022A
公开(公告)日：2009-03-25
申请号：CN200710122175.X
申请日：2007-09-21
Applicant: 中国医学科学院北京协和医院
IPC: C07K14/415 , C07K16/18
Abstract: 本发明提供了葎草花粉主要致敏蛋白单克隆抗体，其是以葎草花粉主要致敏蛋白作为免疫原制备获得。所述葎草花粉主要致敏蛋白可从葎草花粉中分离获得，能与89％以上葎草花粉过敏病人血清特异性IgE结合，经SDS－PAGE测定其表观分子量约为12kDa，等电点为4.7，N端序列为：NH4+－MDNPFENGMKA－COO－。其可用于葎草花粉变应原制剂中主要致敏蛋白的定量标示。
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