公开(公告)号：CN116478901A

公开(公告)日：2023-07-25

申请号：CN202310413139.8

申请日：2023-04-18

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 齐凤慧 ,  詹亚光 ,  曹源 ,  曾凡锁 ,  郭欣悦 ,  张开放 ,  孔繁秋 ,  汤明硕 ,  王文明 ,  张永存 ,  呼和木仁 ,  贾树龙 ,  李艳秋 ,  纪玉存 ,  于英杰

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种高效水曲柳球形胚诱导和增殖的方法，选择水曲柳单细胞或小细胞团为材料，通过两步法诱导水曲柳球形胚并使其增殖，首先将单细胞或小细胞团接种到含有2，4‑D和柠檬酸钾的WPM培养基中，黑暗条件下震荡培养7‑8周，之后接种到含有柠檬酸钾的WPM培养基中，黑暗条件下震荡培养，使培养物继续形成球形胚并增殖。该方法的建立解决了水曲柳体细胞胚发生诱导中材料来源的局限性，并为水曲柳体细胞胚发生途径规模化繁殖奠定基础，对林木无性繁殖及规模化生产具有重要的意义。

公开(公告)号：CN117660293A

公开(公告)日：2024-03-08

申请号：CN202311658679.9

申请日：2023-12-06

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 齐凤慧 ,  李晴 ,  刘晓诺 ,  郭欣悦 ,  詹亚光 ,  曹源 ,  张开放 ,  孔繁秋 ,  张晨曦

IPC: C12N5/04 ,  A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种利用胚性细胞诱导水曲柳体细胞胚发生的方法，该方法选择以水曲柳胚性细胞为材料，通过均一化和增殖培养获得生长状态相同的水曲柳胚性细胞，所选培养基为WPM+60g/L蔗糖+0.05‑1.0g/L水解酪蛋白+6.0g/L琼脂+1.5g/L活性炭的培养基中；之后将胚性细胞转入水曲柳体细胞胚成熟培养基(WPM+0.05‑0.2mg/L NAA+1.0‑3.0mg/L ZT+0.05‑0.5mg/LGA3+30g/L蔗糖+6.0g/L琼脂+1.5g/L活性炭)中进行培养，获得球形胚、心形胚、鱼雷型胚、子叶胚和成熟体胚，最后获得水曲柳苗。在胚性细胞均一化培养和体细胞胚成熟培养中，均可以采用固体培养法和固液混合培养法，该方法可以使90％胚性细胞发育成成熟体胚。本发明克服了水曲柳体胚诱导过程中材料单一并受季节限制的问题，同时减少了畸形胚的比例，为水曲柳优良品种规模化繁殖奠定基础。

公开(公告)号：CN116420620A

公开(公告)日：2023-07-14

申请号：CN202310426005.X

申请日：2023-04-20

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 齐凤慧 ,  孔繁秋 ,  张开放 ,  曹源 ,  郭欣悦 ,  詹亚光 ,  曾凡锁 ,  王文明 ,  张永存 ,  呼和木仁 ,  贾树龙 ,  李艳秋 ,  纪玉存 ,  于英杰

IPC: A01H4/00 ,  A01H1/02

Abstract: 本发明公开了一种通过胚挽救获得水曲柳与白蜡种间杂交F1代的方法，选择赤峰地区的白蜡树作为父本，选择哈尔滨地区本土优良水曲柳作为母本，在5月初，对雌花进行套袋、人工授粉、摘袋，授粉后35d开始取样，果实表面消毒后扒掉果皮获得无菌胚珠，将胚珠接种在发育培养基中，置于25±2℃环境下，黑暗培养7‑8周，胚珠逐渐发育成熟，然后转移至弱光条件下培养，光照强度为10μmol·m‑2·s‑1，光周期12h/d，温度25±2℃，子叶长出并转绿，对没有萌发的胚转入胚的二次萌发培养基中，光照强度为80μmol·m‑2·s‑1，子叶长出并转绿，将长出子叶的胚转移至幼苗生长培养基中，光照培养20‑25d，获得幼苗，该方法可以解决水曲柳与白蜡种间杂交中胚的畸形、幼胚败育、未成熟胚无法获得杂种植株等问题，对林木新品种选育具有重要的意义。

公开(公告)号：CN116420620B

公开(公告)日：2024-01-26

申请号：CN202310426005.X

申请日：2023-04-20

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 齐凤慧 ,  孔繁秋 ,  张开放 ,  曹源 ,  郭欣悦 ,  詹亚光 ,  曾凡锁 ,  王文明 ,  张永存 ,  呼和木仁 ,  贾树龙 ,  李艳秋 ,  纪玉存 ,  于英杰

IPC: A01H4/00 ,  A01H1/02

Abstract: 本发明公开了一种通过胚挽救获得水曲柳与白蜡种间杂交F1代的方法，选择赤峰地区的白蜡树作为父本，选择哈尔滨地区本土优良水曲柳作为母本，在5月初，对雌花进行套袋、人工授粉、摘袋，授粉后35d开始取样，果实表面消毒后扒掉果皮获得无菌胚珠，将胚珠接种在发育培养基中，置于25±2℃环境下，黑暗培养7‑8周，胚珠逐渐发育成熟，然后转移至弱光条件下培养，光照强度为10μmol·m‑2·s‑1，光周期12h/d，温度25±2℃，子叶长出并转绿，对没有萌发的胚转入胚的二次萌发培养基中，光照强度为80μmol·m‑2·s‑1，子叶长出并转绿，将长出子叶的胚转移至幼苗生长培养基中，光照培养20‑25d，获得幼苗，该方法可以解决水曲柳与白蜡种间杂交中胚的畸形、幼胚败育、未成熟胚无法获得杂种植株等问题，对林木新品种选育具有重要的意义。

公开(公告)号：CN116732219A

公开(公告)日：2023-09-12

申请号：CN202310437465.2

申请日：2023-04-23

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 齐凤慧 ,  詹亚光 ,  孔繁秋 ,  曹源 ,  郭欣悦 ,  张开放 ,  曾凡锁 ,  景天忠

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种水曲柳与白蜡种间杂交F1代品种鉴定的方法，该方法利用SSR分子标记技术筛选出2对可以鉴定父本、母本和杂交F1子代的引物，PCR扩增后用12％非变性聚丙烯酰胺电泳进行检测，在凝胶成像仪中观察显色的凝胶，并拍照，统计父本、母本和F1子代之间的差异条带，即父母本的差异条带在F1子代中都存在，说明F1子代为杂交品种。目前对水曲柳与白蜡杂交子代的鉴定多采用田间生长、生理及抗逆特征等指标进行鉴定，不易判别是否为真杂种，本发明能够准确和易于鉴定水曲柳和白蜡杂交种质成分，确定杂交种纯度，为培育新品种并推广具有重要的意义。