公开(公告)号：CN111909953B

公开(公告)日：2023-07-07

申请号：CN202010503531.8

申请日：2020-06-05

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 邹莉 ,  王旭彤 ,  孙婷婷 ,  许昕薷 ,  孙健 ,  曲晓磊 ,  王世新 ,  刘增才 ,  尹龙川

IPC: C12N15/80 ,  C12N15/66 ,  C12N15/65 ,  C12N1/15 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/04 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开一种用于桑黄遗传表达的重组载体及构建方法和遗传转化方法。载体序列如SEQ ID No:13所示。构建方法：将双元载体pCAMBIA‑1301的CaMV35S启动子替换为桑黄同源启动子,获得适用于桑黄的双元载体。遗传转化方法：利用冻融法将重组双元载体转入根癌农杆菌，获得阳性菌；利用农杆菌侵染桑黄菌丝，并在培养基上共培养，随后覆盖低熔点PDA培养基；随后将菌落转移至新的培养基，选取长势旺盛的菌落提取DNA，利用PCR技术鉴定阳性菌株。本发明具有操作简单，转化率高等优点，成功实现了桑黄的遗传转化，使得在桑黄中进行同源敲除、过表达、异源表达成为可能，解决了无法建立桑黄遗传转化体系的问题。

公开(公告)号：CN111909953A

公开(公告)日：2020-11-10

申请号：CN202010503531.8

申请日：2020-06-05

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 邹莉 ,  王旭彤 ,  孙婷婷 ,  许昕薷 ,  孙健 ,  曲晓磊 ,  王世新 ,  刘增才 ,  尹龙川

IPC: C12N15/80 ,  C12N15/66 ,  C12N15/65 ,  C12N1/15 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/04 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开一种用于桑黄遗传表达的重组载体及构建方法和遗传转化方法。载体序列如SEQ ID No:13所示。构建方法：将双元载体pCAMBIA-1301的CaMV35S启动子替换为桑黄同源启动子,获得适用于桑黄的双元载体。遗传转化方法：利用冻融法将重组双元载体转入根癌农杆菌，获得阳性菌；利用农杆菌侵染桑黄菌丝，并在培养基上共培养，随后覆盖低熔点PDA培养基；随后将菌落转移至新的培养基，选取长势旺盛的菌落提取DNA，利用PCR技术鉴定阳性菌株。本发明具有操作简单，转化率高等优点，成功实现了桑黄的遗传转化，使得在桑黄中进行同源敲除、过表达、异源表达成为可能，解决了无法建立桑黄遗传转化体系的问题。