公开(公告)号：CN112352675B

公开(公告)日：2021-09-10

申请号：CN202010262337.5

申请日：2020-04-06

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 曲冠证 ,  刘彩霞 ,  李开隆

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明属于植物生物技术领域，主要提供了一种可实现植株再生的银中杨激素自养型细胞系，并建立了悬浮培养体系和不定芽分化生根的植株再生体系。单核靠边期的银中杨花粉在添加有2mg/L 2,4‑D、0.5mg/L KT、30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂的MS培养基中诱导出愈伤组织，通过连续继代培养5次后获得质地松散、生长旺盛的浅黄色愈伤组织。将该愈伤组织在仅含30g/L蔗糖的MS培养基中仍能快速生长，为激素自养型细胞系；将该激素自养型细胞系接种于含有50g/L蔗糖的50mL MS液体培养基的150mL玻璃三角瓶中悬浮培养18d后生长量约增长9.2倍；在添加有0.05mg/L TDZ、25g/L蔗糖和7.5g/L琼脂的MS培养基中培养3个月诱导形成大量不定芽；将不定芽接种于生根培养基中培养30天，不定芽生根，形成再生植株。

公开(公告)号：CN112352675A

公开(公告)日：2021-02-12

申请号：CN202010262337.5

申请日：2020-04-06

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 曲冠证 ,  刘彩霞 ,  李开隆

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明属于植物生物技术领域，主要提供了一种可实现植株再生的银中杨激素自养型细胞系，并建立了悬浮培养体系和不定芽分化生根的植株再生体系。单核靠边期的银中杨花粉在添加有2mg/L 2,4‑D、0.5mg/L KT、30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂的MS培养基中诱导出愈伤组织，通过连续继代培养5次后获得质地松散、生长旺盛的浅黄色愈伤组织。将该愈伤组织在仅含30g/L蔗糖的MS培养基中仍能快速生长，为激素自养型细胞系；将该激素自养型细胞系接种于含有50g/L蔗糖的50mL MS液体培养基的150mL玻璃三角瓶中悬浮培养18d后生长量约增长9.2倍；在添加有0.05mg/L TDZ、25g/L蔗糖和7.5g/L琼脂的MS培养基中培养3个月诱导形成大量不定芽；将不定芽接种于生根培养基中培养30天，不定芽生根，形成再生植株。

公开(公告)号：CN115404282A

公开(公告)日：2022-11-29

申请号：CN202211217471.9

申请日：2022-10-04

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 刘彩霞 ,  曲冠证 ,  陈肃 ,  王遂 ,  刘文轩 ,  樊二勤 ,  刘宇航

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开一种快速鉴定小黑杨纯合二倍体的方法。本发明基于小黑杨全基因组重测序的信息，筛选出可以鉴定小黑杨特定SNP位点的特异性引物，通过SNP分子标记技术和PCR技术相结合的方法，进行鉴定由小黑杨获得的纯合二倍体，其具有高效、精确、可重复性高的特点。相对于传统鉴定方法而言，本发明可在极短的时间内获得结果，大幅度减少工作时间和工作量，且实验结果也更加真实可靠。本发明属于首次建立了高效的小黑杨纯合二倍体鉴定方法，可为其他杨树的单倍体育种提供有价值的参考。

公开(公告)号：CN115058381A

公开(公告)日：2022-09-16

申请号：CN202210847072.4

申请日：2022-07-07

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 曲冠证 ,  刘彩霞 ,  由香玲 ,  陈肃 ,  樊二勤

IPC: C12N5/04 ,  A01H4/00 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开一种小黑杨单倍体细胞系的获得方法，以单核靠边期的小黑杨花药为外植体，将消毒处理好的花药放入愈伤组织诱导培养基中诱导出愈伤组织。通过流式细胞仪分析筛选出单倍体愈伤组织，将单倍体愈伤组织转移到增殖培养基中进行增殖培养，生长成适合悬浮培养的状态，将适宜的愈伤组织转移到液体培养基中，成为稳定的悬浮细胞系。本发明以单倍体具有极高的变异率为出发点，结合植物悬浮细胞培养技术，首次在林木中获得生长稳定的悬浮细胞系同时建立植株再生体系，为进一步通过单倍体诱导获得杨树优良品细胞系和新品种提供了技术支持。

公开(公告)号：CN112359010A

公开(公告)日：2021-02-12

申请号：CN202010292206.1

申请日：2020-04-14

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 曲冠证 ,  刘彩霞 ,  樊二勤

IPC: C12N5/04 ,  C12N5/02 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明属于植物生物技术领域，主要提供一种小黑杨单倍体细胞系Qu‑1的获得及其悬浮培养方法。选取单核靠边期的小黑杨花粉，添加有2mg/L 2,4‑D、1mg/L KT、30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂的MS培养基中诱导出愈伤组织，连续增殖培养3次后，通过SNP检测和流式细胞仪分析筛选出单倍体细胞系，之后相同条件下增殖培养5次后，分别取1.15g单倍体细胞系置于含有1.25mg/L 2,4‑D、0.2mg/L KT、50g/L蔗糖的50mL MS液体培养基的150mL玻璃三角瓶中培养6d后发现仅有一个单倍体细胞系具有良好分散性且生长旺盛，命名为Qu‑1，统计18d内的细胞增长量，培养到16d后，生长量达到最高为0.39g(鲜重)，约增长17.72倍。