公开(公告)号：CN117418319A

公开(公告)日：2024-01-19

申请号：CN202311275904.0

申请日：2023-09-28

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 牟彦双 ,  刘忠华 ,  梁英娟 ,  王金鹏 ,  耿立爽 ,  姚晓霞

IPC: C40B40/02 ,  C40B50/06 ,  C12N15/12 ,  C12N15/867 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种猪全转录因子激活文库构建方法及其筛选调控OCT4基因的转录因子的方法，属于分子生物学领域。本发明解决了目前基因组规模的功能获得筛选方法在很大程度上局限于cDNA文库过表达系统的使用，而合成和使用聚合cDNA文库的成本高且复杂的问题。本发明为了筛选猪中调控OCT4表达的转录因子，构建了猪全转录因子CRISPR激活文库，具体技术方案如下：首先筛选猪的转录因子，针对转录因子设计合成sgRNA后构建慢病毒sgRNA文库，同时构建既表达OCT4启动子驱动的EGFP，又表达dCas9‑SAM系统元件的细胞系，最后利用构建好的sgRNA文库感染该细胞系，再通过sgRNA富集来筛选调控OCT4表达的转录因子。本研究所述的方法可为猪这一物种筛选和研究转录因子功能及调控网络提供有力的工具。