公开(公告)号：CN101948928A

公开(公告)日：2011-01-19

申请号：CN201010511965.9

申请日：2010-10-19

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 杨志彪 ,  崔立 ,  袁聪俐 ,  华修国 ,  杨卫军

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/14 ,  C12Q1/06 ,  G01N21/64

Abstract: 一种生物技术领域的猪链球菌2型GDH基因的荧光定量PCR检测方法，根据猪链球菌的GDH基因的序列，设计一对特异性引物F1、R1和TaqMan探针，探针5′端标记的荧光报告基团为FAM，3′端标记的淬灭基团为Eclipse，扩增目的片断长度为81bp；将含有目的基因的片段克隆到pMD18-T载体中，转化到JM109感受态细胞，挑取阳性克隆鉴定；提取阳性质粒，用分光光度计测定OD260nm值，并将质粒浓度换算成拷贝数/μl，质粒标准品10倍梯度稀释作为模板，在荧光定量PCR仪上检测，得出标准曲线；采集猪血液并提取血液全基因组DNA，采用已建立的荧光定量PCR方法，根据标准曲线计算出待检样品中猪链球菌含量；本发明可以实时定量检测血液中细菌含量，灵敏度高、特异性强、重复性好，易于推广应用。