本发明涉及内毒素检测技术领域，具体涉及一种L‑天冬酰胺细菌内毒素检测方法，包括以下步骤：a.反应溶液制备；b.试剂复溶；c.加样及反应；通过本发明提供的L‑天冬酰胺细菌内毒素检测方法，具有操作简单快速，无需特殊仪器设备，可用于注射药物中L‑天冬酰胺原料的内毒素检测。本发明提供的L‑天冬酰胺细菌内毒素检测方法，利用终点荧光测定法，灵敏度强，特异性高，稳定且试剂简单易得；相比于鲎试剂内毒素检测，具有更高的特异性，精密度和准确度。