本发明提供了一种二甲基咪唑钴修饰的二氧化锰微球的制备方法，是将二氧化锰微球完全溶解于硝酸钴的甲醇溶液中，再加入2‑甲基咪唑的甲醇溶液，搅拌，离心，洗涤，干燥，得到二甲基咪唑钴修饰的二氧化锰微球。该材料具备易于合成、高比表面积、高负载能力、渗透性好、扩散路径短、优异的热稳定性等优点。作为一种新型的酶固定化载体，乙酰胆碱酯酶通过静电相互作用固定于二甲基咪唑钴修饰的二氧化锰微球上。本发明还提供固定化乙酰胆碱酯酶结合毛细管电泳技术，从中药旋覆花中筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂的应用。本发明的固定化乙酰胆碱酯酶具有耐pH范围广、热稳定性好、可重复使用、酶活力强等优点。