本发明公开了一种耐受戊二胺的重组大肠杆菌构建及应用。通过大肠杆菌ASKA文库筛选出大量潜在戊二胺耐受靶点，结合生物信息学技术，最终挖掘到编码内膜蛋白的耐受基因ydgK。通过在高产赖氨酸的大肠杆菌KA30中过表达，菌株在含30 g/L戊二胺的培养基中生长延滞期缩短39.3%，证实靶点具有提升底盘细胞戊二胺耐受能力的功能，进一步将其整合至KA30基因组中转座子IS1上，实现基因组多拷贝稳定表达。将重组大肠杆菌应用到戊二胺生产中，最终实现发酵生产戊二胺产量提升20.6%。本发明具有过程简洁、效果显著等特点，是一条简单、快速、高效的提升工业底盘细胞鲁棒性的方法。