本发明公开了一种彩色显微图像序列中固点噪声的定位方法，通过结合少量帧图像计算各帧图像相同坐标位置处像素点的红色、绿色、蓝色分量的均值和方差，据此均值和方差来判断当前帧图像中对应像素点是否为固点噪声，本发明方法利用较少的N帧图像就能够精确定位彩色图像中固点噪声的位置，为下一步噪声抑制或滤除打下了良好地基础，而无需像基于高斯模型的统计法一样需要长时间、连续多帧图像作为样本来判断；此外，本发明方法无需经使用者的干预调整，具有较强的鲁棒性，对绝大部分的医学显微图像都适用。