一种与布鲁氏菌毒力相关的small RNA及其在制备弱毒布鲁氏菌中的应用

    公开(公告)号:CN109593761B

    公开(公告)日:2022-04-22

    申请号:CN201811572734.1

    申请日:2018-12-21

    Inventor: 步志高 胡森 许达

    Abstract: 本发明公开了一种与布鲁氏菌毒力相关的small RNA及其在制备弱毒布鲁氏菌中的应用。本发明应用Northern blot证明在布鲁氏菌强毒株M28中存在sRNA Clu7,利用同源重组的方法,构建了该sRNA缺失株M28ΔClu7,以鼠巨噬细胞RAW264.7和Balb/c小鼠为模型评估了该sRNA对M28毒力的影响。结果显示该sRNA缺失后能显著下调强毒株M28在鼠巨噬细胞RAW264.7和小鼠脾脏内复制生存的能力。在接种第5周时,M28ΔClu7从小鼠体内完全清除,与M28相比毒力显著下降。小鼠攻毒保护实验显示:免疫M28ΔClu7对小鼠抵抗强毒M28感染的保护效果达到了疫苗株M5‑90的保护力。以上结果预示着sRNA Clu7对布鲁氏菌的毒力有巨大的决定作用。本发明的提出对揭示布鲁氏菌毒力机制起到了巨大的推动作用。为布鲁氏菌新候选疫苗株的研发提供了新的技术手段。

    一种基于表达绿色荧光蛋白的重组寨卡病毒的药物筛选系统及其应用

    公开(公告)号:CN110195093A

    公开(公告)日:2019-09-03

    申请号:CN201910318209.5

    申请日:2019-04-19

    Inventor: 步志高 华荣虹

    Abstract: 本发明公开了一种基于表达绿色荧光蛋白的重组寨卡病毒的药物筛选系统及其应用。本发明的一种药物筛选系统由表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组寨卡病毒(报告型寨卡病毒)以及表达DC-SIGNR的BHK-21细胞系组成。本发明的报告型寨卡病毒表达绿色荧光蛋白,荧光号强,且在胞浆内均匀着色,易于观察,易于高通量筛选分析。稳定表达DC-SIGNR的BHK-21细胞系提高了对报告型寨卡病毒感染的敏感性,提高了病毒复制效率,减少了病毒复制压力,也提高了重组病毒的稳定性。通过本发明的药物筛选系统可在活细胞状态下对药物作用前后的病毒复制情况进行直接观察与分析,不需要对细胞进行固定与免疫染色,使整个操作流程更简便快捷,且减少了活病毒操作步骤,提高了整个操作流程的安全性。

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