一种甘蔗液体浅层培养方法

    公开(公告)号:CN102668989A

    公开(公告)日:2012-09-19

    申请号:CN201210193814.2

    申请日:2012-06-13

    Abstract: 本发明涉及一种甘蔗液体浅层培养方法,包括抑菌剂的配制、培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽。采用本发明的甘蔗液体浅层培养方法,培养基无需高压灭菌,简化了培养基的配制环节;本发明的培养基中省去了琼脂粉,并且提高增殖率29.2%以上,每丛壮苗数提高53.9%以上,可以降低组培成本25%以上;而且,粗壮的瓶苗有利于瓶苗移栽。本发明具有操作简单,投资少,实用性强,推广性好的特点,适合在甘蔗组培工厂化育苗中推广。

    一种检测甘蔗宿根矮化病菌的实时荧光定量PCR方法

    公开(公告)号:CN102312016A

    公开(公告)日:2012-01-11

    申请号:CN201110316557.2

    申请日:2011-10-18

    Abstract: 本发明首先提供了一种利用实时荧光定量PCR方法检测甘蔗宿根矮化病菌的引物及探针,所述的引物为以下序列的引物对:正向引物序列5’-GGTTCCATTGCTTACCGATT-3’,反向引物序列5’-CAAGTTTCGACAGGAACAGC-3’,探针序列是FAM-5-CCACGGCTACGTCAATTCGGG-3-TAMRA。以上面提供的引物对与探针在实时荧光定量PCR仪中检测甘蔗中感染的宿根矮化病菌Pat1基因。通过PCR扩增过程生成的Ct值,利用已经建好的标准曲线将Ct值转换成起始反应的核酸分子拷贝数,从而达到定量检测甘蔗中感染宿根矮化病菌的数量。该方法可应用于甘蔗健康种苗检测、甘蔗抗性鉴定方面。

    利用甘蔗汁促进甘蔗壮苗的组培方法

    公开(公告)号:CN101983558A

    公开(公告)日:2011-03-09

    申请号:CN201010578865.8

    申请日:2010-12-08

    Abstract: 一种利用甘蔗汁促进甘蔗壮苗的组培方法,包括材料选择、诱导培养、继代培养、分化培养和壮苗培养;其中,壮苗培养的培养基为MS+1.0mg/LBA+0.5mg/LKT+5%~15%体积甘蔗汁+20g/L蔗糖+6g/L琼脂粉。甘蔗汁中除了糖分本身外,蔗汁中的一些微量元素和未知的内源激素也是促进甘蔗瓶苗健壮的主要因素。经多次试验和统计分析,表明甘蔗组织培养分化丛芽后,使用含10%体积甘蔗汁的壮苗培养基,壮苗数提高了56%,移苗成活率达94.5%,效果显著,而且操作方法简单,实用性强,推广性好。

    一种利用球磨机高通量提取甘蔗叶片基因组的方法

    公开(公告)号:CN101899435A

    公开(公告)日:2010-12-01

    申请号:CN201010265842.1

    申请日:2010-08-30

    Abstract: 一种利用球磨机高通量提取甘蔗叶片基因组的方法,是针对甘蔗的特殊性利用球磨机对其叶片基因组DNA进行分离的技术。利用球磨机改变磁场使金属珠子一次对多个甘蔗叶片样品进行研磨的特点,优化了钢珠直径、液氮预处理时间、叶片用量、研磨时间等参数,建立了一种适合大批量提取甘蔗叶片基因组的方法。方法的主要步骤包括取样、预冻、研磨、化学抽提等步骤。该方法克服了目前制备甘蔗基因组DNA存在的磨样费时费力、操作繁琐、叶片用量大、交叉污染率高、效率低等缺点,具有适用范围广,简便快速、污染率低、取样量少等优点,特别适宜于大批量快速制备甘蔗叶片基因组。

    利用pmi基因快速获得转基因甘蔗的方法

    公开(公告)号:CN101270353B

    公开(公告)日:2010-09-08

    申请号:CN200710008719.X

    申请日:2007-03-19

    Abstract: 一种利用pmi基因快速获得转基因甘蔗的方法,主要内容包括:甘露糖筛选体系的建立,基因枪转化和抗性愈伤组织的获得,抗性愈伤组织的分化筛选,抗性苗的获得和生根,抗性再生苗的分子检测和氯酚红法检测法检测pmi基因表达。本发明转化周期短,选择标记系统具有产物安全、选择程序简单、筛选效果显著而且不影响转化植物的代谢平衡等优点,并且检测手段快速、灵敏、可信度高的。利用该技术12周即可获得大量的目标转基因再生苗,解决了转基因安全问题。

    一种提高甘蔗愈伤组织繁殖系数的方法

    公开(公告)号:CN101560493A

    公开(公告)日:2009-10-21

    申请号:CN200910111896.X

    申请日:2009-06-03

    Abstract: 本发明涉及一种提高甘蔗愈伤组织繁殖系数的方法,具体是通过添加一定体积的椰乳大幅度提高甘蔗愈伤组织的分化率和培育壮苗。该发明的设计方案是:将处理过的甘蔗茎尖心叶经过诱导产生愈伤组织后,在分化阶段往培养基中添加5%~20%体积的椰乳,可以极显著地提高愈伤组织分化率,一般比对照提高100%,并且培育壮苗。该方法解决了甘蔗组织培养中某些品种能够正常诱导愈伤组织但分化困难的问题,有效完善了甘蔗组培再生体系,极显著提高愈伤组织分化率,促进组织培养在良种快繁中的广泛应用。

    利用DREB2B基因培育耐旱甘蔗品种的方法

    公开(公告)号:CN101503692A

    公开(公告)日:2009-08-12

    申请号:CN200810070621.1

    申请日:2008-02-05

    Abstract: 一种利用DREB2B基因培育耐旱甘蔗品种的方法,包括含有DREB2B基因的植物表达载体的构建、抗旱转DREB2B基因材料的培育以及抗旱转基因甘蔗新材料的筛选鉴定。根据上述培育方法,甘蔗在干旱胁迫下诱导抗旱基因的表达,其抗旱性明显优于受体品种,而且不同无性世代间基本保持稳定;在干旱条件下,生长快于受体品种,株高增加20%以上,有效茎数增加30%以上,每公顷蔗茎产量增加 30%,甘蔗糖份(绝对值)提高1.5%以上。

    植物单花粉高通量收集与PCR检测方法

    公开(公告)号:CN101020925A

    公开(公告)日:2007-08-22

    申请号:CN200710008694.3

    申请日:2007-03-14

    Abstract: 本发明公开一种植物单花粉高通量收集与PCR检测方法,包括步骤为:显微镜分离花粉以及花粉破囊壁和染色;分装碱性裂解液于PCR板中,密封并离心使裂解液沉于管底;显微镜下用特殊镊子挑选着色单花粉粒并放入PCR管裂解液中;分装矿物油于PCR板中,短暂离心;置于PCR仪上90-98℃温度下裂解;在各管中加入TE缓冲液中和,离心,加入PCR反应成分;短暂离心,置于PCR仪上,反应参数为:90-98℃保持3-8分钟,热循环依不同反应而定,循环数为35-40,最后72℃延伸5-10分钟,保持于4℃下;PCR产物用电泳分离并在成像系统上进行扫描拍照。本发明具有效率高等优点,特别适用于生殖遗传统计分析。

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