公开(公告)号：CN103014172A

公开(公告)日：2013-04-03

申请号：CN201310015708.X

申请日：2013-01-16

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 阙友雄 ,  许莉萍 ,  张玉叶 ,  郭晋隆 ,  徐景升 ,  罗俊 ,  高世武 ,  陈如凯

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明涉及一种检测甘蔗黄锈病菌的实时荧光定量PCR方法，包括基因组DNA提取、实时荧光定量PCR检测体系建立、实验有效性判定以及实时荧光定量PCR检测。本发明的一种检测甘蔗黄锈病菌的实时荧光定量PCR方法，具有灵敏度高，特异性好，所需要的DNA用量少的特点；与常规的根据病菌培养后的孢子形态特征鉴定、根据田间种植后病害表型症状鉴定以及常规PCR检测技术相比，具有灵敏度高，特异性好，样品消耗少，还能实时直观地监测PCR扩增过程等优点。为甘蔗黄锈病菌的鉴定，提供了高灵敏度、特异性强的快速检测体系，可用于田间甘蔗黄锈病菌的早期诊断及检测，对抗黄锈病甘蔗育种和抗黄锈病甘蔗种质资源的保护具有重要的意义。

公开(公告)号：CN102311954B

公开(公告)日：2013-02-27

申请号：CN201110316550.0

申请日：2011-10-18

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 王恒波 ,  陈平华 ,  郭晋隆 ,  许莉萍 ,  张华 ,  高三基 ,  陈如凯

IPC: C12N15/11 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明提供了一种转基因番木瓜55-1转化事件特异性PCR检测方法，首先涉及一种转基因番木瓜55-1转化事件外源插入载体旁侧DNA片段，其碱基序列如SEQ.NO.1所示，由来源于番木瓜基因组序列的第1至1432碱基和来源于外源载体序列的第1433至3780个碱基共同组成。根据SEQNO.1所示的序列设计特异性引物，对待测样品DNA进行扩增，若扩增获得目的片段，则待测样品含有转基因番木瓜55-1转化事件来源的成分。本发明能够利用普通的PCR仪器、试剂快速准确鉴别出转基因番木瓜55-1，适用于对转基因番木瓜55-1（包括杂种F1代和后代）及其衍生产品进行检测、监测和标识制度管理。

公开(公告)号：CN102312016B

公开(公告)日：2013-01-02

申请号：CN201110316557.2

申请日：2011-10-18

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 王恒波 ,  郭晋隆 ,  许莉萍 ,  高三基 ,  陈如凯 ,  陈平华

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明首先提供了一种利用实时荧光定量PCR方法检测甘蔗宿根矮化病菌的引物及探针，所述的引物为以下序列的引物对：正向引物序列5’-GGTTCCATTGCTTACCGATT-3’，反向引物序列5’-CAAGTTTCGACAGGAACAGC-3’，探针序列是FAM-5-CCACGGCTACGTCAATTCGGG-3-TAMRA。以上面提供的引物对与探针在实时荧光定量PCR仪中检测甘蔗中感染的宿根矮化病菌Pat1基因。通过PCR扩增过程生成的Ct值，利用已经建好的标准曲线将Ct值转换成起始反应的核酸分子拷贝数，从而达到定量检测甘蔗中感染宿根矮化病菌的数量。该方法可应用于甘蔗健康种苗检测、甘蔗抗性鉴定方面。

公开(公告)号：CN102312016A

公开(公告)日：2012-01-11

申请号：CN201110316557.2

申请日：2011-10-18

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 王恒波 ,  郭晋隆 ,  许莉萍 ,  高三基 ,  陈如凯 ,  陈平华

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明首先提供了一种利用实时荧光定量PCR方法检测甘蔗宿根矮化病菌的引物及探针，所述的引物为以下序列的引物对：正向引物序列5’-GGTTCCATTGCTTACCGATT-3’，反向引物序列5’-CAAGTTTCGACAGGAACAGC-3’，探针序列是FAM-5-CCACGGCTACGTCAATTCGGG-3-TAMRA。以上面提供的引物对与探针在实时荧光定量PCR仪中检测甘蔗中感染的宿根矮化病菌Pat1基因。通过PCR扩增过程生成的Ct值，利用已经建好的标准曲线将Ct值转换成起始反应的核酸分子拷贝数，从而达到定量检测甘蔗中感染宿根矮化病菌的数量。该方法可应用于甘蔗健康种苗检测、甘蔗抗性鉴定方面。