一种检测甘蔗黄锈病菌的实时荧光定量PCR方法

    公开(公告)号:CN103014172A

    公开(公告)日:2013-04-03

    申请号:CN201310015708.X

    申请日:2013-01-16

    Abstract: 本发明涉及一种检测甘蔗黄锈病菌的实时荧光定量PCR方法,包括基因组DNA提取、实时荧光定量PCR检测体系建立、实验有效性判定以及实时荧光定量PCR检测。本发明的一种检测甘蔗黄锈病菌的实时荧光定量PCR方法,具有灵敏度高,特异性好,所需要的DNA用量少的特点;与常规的根据病菌培养后的孢子形态特征鉴定、根据田间种植后病害表型症状鉴定以及常规PCR检测技术相比,具有灵敏度高,特异性好,样品消耗少,还能实时直观地监测PCR扩增过程等优点。为甘蔗黄锈病菌的鉴定,提供了高灵敏度、特异性强的快速检测体系,可用于田间甘蔗黄锈病菌的早期诊断及检测,对抗黄锈病甘蔗育种和抗黄锈病甘蔗种质资源的保护具有重要的意义。

    一种开放式培养甘蔗脱毒种苗的方法

    公开(公告)号:CN102405842B

    公开(公告)日:2013-03-20

    申请号:CN201110311185.4

    申请日:2011-10-14

    Inventor: 林庆良 许莉萍

    Abstract: 本发明涉及一种开放式培养甘蔗脱毒种苗的方法,包括种茎热水处理、抑菌剂的配制、器皿消毒、接种操作、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽。采用本发明的开放式培养甘蔗脱毒种苗的方法,培养基无需高压灭菌,接种只要在自然、开放的环境中进行,不需要超净工作台,从根本上简化组培环节,降低组培成本;开放组培与传统组培对比,至少可以降低成本20%以上。而且操作简单,只要按不同的培养基配方配制后,再加上抑菌剂即可.投资少,实用性强,推广性好,适合在蔗农中推广。

    转基因番木瓜55-1转化事件特异性PCR检测方法

    公开(公告)号:CN102311954B

    公开(公告)日:2013-02-27

    申请号:CN201110316550.0

    申请日:2011-10-18

    Abstract: 本发明提供了一种转基因番木瓜55-1转化事件特异性PCR检测方法,首先涉及一种转基因番木瓜55-1转化事件外源插入载体旁侧DNA片段,其碱基序列如SEQ.NO.1所示,由来源于番木瓜基因组序列的第1至1432碱基和来源于外源载体序列的第1433至3780个碱基共同组成。根据SEQNO.1所示的序列设计特异性引物,对待测样品DNA进行扩增,若扩增获得目的片段,则待测样品含有转基因番木瓜55-1转化事件来源的成分。本发明能够利用普通的PCR仪器、试剂快速准确鉴别出转基因番木瓜55-1,适用于对转基因番木瓜55-1(包括杂种F1代和后代)及其衍生产品进行检测、监测和标识制度管理。

    一种构树简便组培方法
    74.
    发明授权

    公开(公告)号:CN102577976B

    公开(公告)日:2013-01-02

    申请号:CN201210070464.0

    申请日:2012-03-17

    Abstract: 本发明涉及一种构树简便组培方法,包括抑菌剂的配制、培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽。采用本发明的构树简便组培方法,培养容器和培养基都无需进行高温高压灭菌,减少了工作量和能源消耗,简化了构树组培环节,降低了构树组培成本;本发明的构树简便组培方法,操作简单,只要按不同的培养基配方配制后,再加上抑菌剂即可,实用性强,推广性好;本发明的构树简便组培方法与常规的构树组培方法对比,可以降低成本10%以上。

    一种检测甘蔗宿根矮化病菌的实时荧光定量PCR方法

    公开(公告)号:CN102312016B

    公开(公告)日:2013-01-02

    申请号:CN201110316557.2

    申请日:2011-10-18

    Abstract: 本发明首先提供了一种利用实时荧光定量PCR方法检测甘蔗宿根矮化病菌的引物及探针,所述的引物为以下序列的引物对:正向引物序列5’-GGTTCCATTGCTTACCGATT-3’,反向引物序列5’-CAAGTTTCGACAGGAACAGC-3’,探针序列是FAM-5-CCACGGCTACGTCAATTCGGG-3-TAMRA。以上面提供的引物对与探针在实时荧光定量PCR仪中检测甘蔗中感染的宿根矮化病菌Pat1基因。通过PCR扩增过程生成的Ct值,利用已经建好的标准曲线将Ct值转换成起始反应的核酸分子拷贝数,从而达到定量检测甘蔗中感染宿根矮化病菌的数量。该方法可应用于甘蔗健康种苗检测、甘蔗抗性鉴定方面。

    一种甘蔗液体浅层培养方法

    公开(公告)号:CN102668989A

    公开(公告)日:2012-09-19

    申请号:CN201210193814.2

    申请日:2012-06-13

    Abstract: 本发明涉及一种甘蔗液体浅层培养方法,包括抑菌剂的配制、培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽。采用本发明的甘蔗液体浅层培养方法,培养基无需高压灭菌,简化了培养基的配制环节;本发明的培养基中省去了琼脂粉,并且提高增殖率29.2%以上,每丛壮苗数提高53.9%以上,可以降低组培成本25%以上;而且,粗壮的瓶苗有利于瓶苗移栽。本发明具有操作简单,投资少,实用性强,推广性好的特点,适合在甘蔗组培工厂化育苗中推广。

    一种检测甘蔗宿根矮化病菌的实时荧光定量PCR方法

    公开(公告)号:CN102312016A

    公开(公告)日:2012-01-11

    申请号:CN201110316557.2

    申请日:2011-10-18

    Abstract: 本发明首先提供了一种利用实时荧光定量PCR方法检测甘蔗宿根矮化病菌的引物及探针,所述的引物为以下序列的引物对:正向引物序列5’-GGTTCCATTGCTTACCGATT-3’,反向引物序列5’-CAAGTTTCGACAGGAACAGC-3’,探针序列是FAM-5-CCACGGCTACGTCAATTCGGG-3-TAMRA。以上面提供的引物对与探针在实时荧光定量PCR仪中检测甘蔗中感染的宿根矮化病菌Pat1基因。通过PCR扩增过程生成的Ct值,利用已经建好的标准曲线将Ct值转换成起始反应的核酸分子拷贝数,从而达到定量检测甘蔗中感染宿根矮化病菌的数量。该方法可应用于甘蔗健康种苗检测、甘蔗抗性鉴定方面。

    利用甘蔗汁促进甘蔗壮苗的组培方法

    公开(公告)号:CN101983558A

    公开(公告)日:2011-03-09

    申请号:CN201010578865.8

    申请日:2010-12-08

    Abstract: 一种利用甘蔗汁促进甘蔗壮苗的组培方法,包括材料选择、诱导培养、继代培养、分化培养和壮苗培养;其中,壮苗培养的培养基为MS+1.0mg/LBA+0.5mg/LKT+5%~15%体积甘蔗汁+20g/L蔗糖+6g/L琼脂粉。甘蔗汁中除了糖分本身外,蔗汁中的一些微量元素和未知的内源激素也是促进甘蔗瓶苗健壮的主要因素。经多次试验和统计分析,表明甘蔗组织培养分化丛芽后,使用含10%体积甘蔗汁的壮苗培养基,壮苗数提高了56%,移苗成活率达94.5%,效果显著,而且操作方法简单,实用性强,推广性好。

    一种利用球磨机高通量提取甘蔗叶片基因组的方法

    公开(公告)号:CN101899435A

    公开(公告)日:2010-12-01

    申请号:CN201010265842.1

    申请日:2010-08-30

    Abstract: 一种利用球磨机高通量提取甘蔗叶片基因组的方法,是针对甘蔗的特殊性利用球磨机对其叶片基因组DNA进行分离的技术。利用球磨机改变磁场使金属珠子一次对多个甘蔗叶片样品进行研磨的特点,优化了钢珠直径、液氮预处理时间、叶片用量、研磨时间等参数,建立了一种适合大批量提取甘蔗叶片基因组的方法。方法的主要步骤包括取样、预冻、研磨、化学抽提等步骤。该方法克服了目前制备甘蔗基因组DNA存在的磨样费时费力、操作繁琐、叶片用量大、交叉污染率高、效率低等缺点,具有适用范围广,简便快速、污染率低、取样量少等优点,特别适宜于大批量快速制备甘蔗叶片基因组。

    一种提高甘蔗愈伤组织繁殖系数的方法

    公开(公告)号:CN101560493A

    公开(公告)日:2009-10-21

    申请号:CN200910111896.X

    申请日:2009-06-03

    Abstract: 本发明涉及一种提高甘蔗愈伤组织繁殖系数的方法,具体是通过添加一定体积的椰乳大幅度提高甘蔗愈伤组织的分化率和培育壮苗。该发明的设计方案是:将处理过的甘蔗茎尖心叶经过诱导产生愈伤组织后,在分化阶段往培养基中添加5%~20%体积的椰乳,可以极显著地提高愈伤组织分化率,一般比对照提高100%,并且培育壮苗。该方法解决了甘蔗组织培养中某些品种能够正常诱导愈伤组织但分化困难的问题,有效完善了甘蔗组培再生体系,极显著提高愈伤组织分化率,促进组织培养在良种快繁中的广泛应用。

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