公开(公告)号：CN103710278A

公开(公告)日：2014-04-09

申请号：CN201310728796.8

申请日：2013-12-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 陆健 ,  吴殿辉 ,  陈坚 ,  李晓敏 ,  谢广发 ,  申超

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81

Abstract: 本发明公开一种低产尿素的工业黄酒酵母代谢工程菌，该工程菌构建方法如下：构建URA3基因敲除组件，分别转化a型和α型单倍体黄酒酵母，得尿嘧啶缺陷型菌株；构建含有PGK1p强启动子和URA3基因的高表达组件，并分别转化所述a型和α型尿嘧啶缺陷型菌株，通过同源重组整合入该菌株基因组，在其DUR1,2基因起始密码前插入PGK1p强启动子，获得DUR1,2基因高表达的原养型单倍体工程菌株，重新融合为二倍体，即得低产尿素的工业黄酒酵母代谢工程菌。本发明工程菌为原养型，生长和发酵能力与亲本菌株相差无几，可明显降低发酵液中尿素和EC的含量，不引入外源基因，生物安全性高，具有良好的工业化应用前景。

公开(公告)号：CN103194439A

公开(公告)日：2013-07-10

申请号：CN201310151599.4

申请日：2013-04-27

Applicant: 江南大学

Inventor： 陆健 ,  吴殿辉 ,  陈坚 ,  李晓敏 ,  谢广发 ,  申超

IPC: C12N15/09 ,  C12N1/18 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开一种工业黄酒酵母单倍体的分离方法。该方法利用Cre/loxp组件和G418抗性标记kanMX基因构建了HO基因敲除组件并成功转化工业黄酒酵母，通过同源重组敲除黄酒酵母的HO基因，继而分离获得单倍体菌株，同时，利用半乳糖培养基诱导Cre重组酶的表达将kanMX基因切除，获得不含外来抗性基因的工业黄酒酵母单倍体。本发明可快速、高效地分离获得不含外来抗性基因的工业黄酒酵母单倍体，具有单倍体分离率和成活率高、工艺简单、生产成本低的优点，为后续黄酒酵母代谢工程改造和遗传学研究奠定了物质基础。