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公开(公告)号：CN114703187B
公开(公告)日：2023-06-30
申请号：CN202210336608.6
申请日：2022-03-31
Applicant: 东北林业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , C12N15/10 , A01H5/00 , A01H6/00
Abstract: 本发明涉及一种水曲柳U6基因启动子proFmU6.7及其克隆与应用。本发明首次成功克隆了水曲柳RNA聚合酶Ⅲ型启动子——水曲柳内源U6基因启动子proFmU6.7，并成功构建了水曲柳U6基因启动子活性检测载体，通过瞬时转化水曲柳幼苗、GUS染色验证，证明该启动子具有高效转录活性。实验证明一种水曲柳U6基因截短启动子proFmU6.7.4具有启动活性，并成功在CRISPR/Cas9系统中应用。水曲柳U6基因启动子proFmU6.7克隆及启动子活性的表达分析，为研究与水曲柳及近缘植物的转化研究提供了高效的启动子序列，也可以实现对水曲柳高效精准的种质创新与品种遗传改良。
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公开(公告)号：CN113430194B
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202011377672.6
申请日：2020-11-30
Applicant: 东北林业大学
IPC: C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/00
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9的白桦基因编辑方法，以白桦中高度保守的BpPDS和BpUVR8为靶基因，在其保守结构域上分别选取了1个和4个靶位，共设计了5个靶序列，构造了pU3b‑sgRNA‑UBQ1‑Cas9转化载体。利用瞬时转染初步鉴定了5个靶序列与白桦基因组的适配度，稳定的农杆菌转化法被用于外源DNA的整合，初步说明BpPDS和BpUVR8‑1这两个靶位可以编辑白桦基因组；BpPDS与BpUVR8‑1稳定遗传转化的编辑效率分别为41.67％、100％，纯合单株的百分比分别为37.5％、100％。该方法的建立一方面，可用于初步鉴定载体的活性，筛选活性较大的靶位，提高转化效率；其次，可用于获得白桦CRISPR/Cas9突变体植株，方便生产规范化，对加快白桦功能基因的研究具有重要意义。
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公开(公告)号：CN114703189A
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN202210336615.6
申请日：2022-03-31
Applicant: 东北林业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/70 , C12N15/84 , C12Q1/6897 , A01H5/00 , A01H6/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及一种水曲柳U6基因启动子proFmU6.3及其克隆与应用。本发明首次成功克隆了水曲柳RNA聚合酶Ⅲ型启动子——水曲柳内源U6基因启动子proFmU6.3，并成功构建了水曲柳U6基因启动子活性检测载体，通过瞬时转化水曲柳幼苗、GUS染色验证，证明该启动子具有高效转录活性，为水曲柳及近缘植物的转化研究提供了高效的启动子序列。
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公开(公告)号：CN113430194A
公开(公告)日：2021-09-24
申请号：CN202011377672.6
申请日：2020-11-30
Applicant: 东北林业大学
IPC: C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/00
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9的白桦基因编辑方法，以白桦中高度保守的BpPDS和BpUVR8为靶基因，在其保守结构域上分别选取了1个和4个靶位，共设计了5个靶序列，构造了pU3b‑sgRNA‑UBQ1‑Cas9转化载体。利用瞬时转染初步鉴定了5个靶序列与白桦基因组的适配度，初步说明BpPDS和BpUVR8‑1这两个靶位可以编辑白桦基因组；稳定的农杆菌转化法被用于外源DNA的整合，BpPDS与BpUVR8‑1稳定遗传转化的编辑效率分别为41.67％、100％，纯合单株的百分比分别为37.5％、100％。该方法的建立，一方面可用于初步鉴定载体的活性，筛选活性较大的靶位，提高编辑效率；另一方面可用于获取白桦CRISPR/Cas9突变体植株，缩短育种周期，为深入研究白桦基因功能及其基因资源的开发利用提供宝贵的材料基础。
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公开(公告)号：CN112106654B
公开(公告)日：2021-05-18
申请号：CN201910503829.6
申请日：2019-06-12
Applicant: 东北林业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种通过不定芽直接萌发途径获得水曲柳再生植株的方法，将水曲柳种子浸泡24h，去掉外种皮，表面消毒进行预培养，此时可以加柠檬酸钾处理；之后取下胚轴接种在不定芽诱导培养基上，暗培养2d下胚轴开始膨大，5d顶端形成突起，11d形成芽点，芽点生成率最高达到82.1％；将材料转入弱光下培养，芽点先生成叶片后生成不定芽，生成率最高为91.6％；之后在正常光照下通过两步法进行伸长培养，最终获得水曲柳再生植株。该方法的建立，可用于濒危植物水曲柳的保育，提高种群数量；也可以通过转基因方式改良水曲柳繁殖体系；还可以对水曲柳不定芽发育过程中相关基因的调控网络进行研究。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110946073B
公开(公告)日：2021-04-16
申请号：CN201811130201.8
申请日：2018-09-27
Applicant: 东北林业大学
Abstract: 本发明公开了一种快速繁殖水曲柳胚性细胞的方法，选取水曲柳愈伤组织，该愈伤组织来源可以是根、茎、叶、种子、胚等多种外植体，将愈伤组织接种在F4固体培养基中，培养1‑2个继代，可得水曲柳胚性愈伤组织；将松散的胚性愈伤组织接种到F4液体培养基中培养2‑3个继代，可以得到水曲柳单细胞和小细胞团。本发明的优点在于选择了F4培养基，该培养基除了常规的WPM基本培养基之外，选择30g/L的蔗糖和BA、NAA、IBA、TDZ四种激素组合，该培养基上的细胞涨势旺盛，只要在生长周期内继代就不会出现褐化死亡的现象。该方法的建立为水曲柳细胞规模化生产及次生代谢产物研究奠定基础。
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公开(公告)号：CN112106654A
公开(公告)日：2020-12-22
申请号：CN201910503829.6
申请日：2019-06-12
Applicant: 东北林业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种通过不定芽直接萌发途径获得水曲柳再生植株的方法，将水曲柳种子浸泡24h，去掉外种皮，表面消毒进行预培养，此时可以加柠檬酸钾处理；之后取下胚轴接种在不定芽诱导培养基上，暗培养2d下胚轴开始膨大，5d顶端形成突起，11d形成芽点，芽点生成率最高达到82.1％；将材料转入弱光下培养，芽点先生成叶片后生成不定芽，生成率最高为91.6％；之后在正常光照下通过两步法进行伸长培养，最终获得水曲柳再生植株。该方法的建立，可用于濒危植物水曲柳的保育，提高种群数量；也可以通过转基因方式改良水曲柳繁殖体系；还可以对水曲柳不定芽发育过程中相关基因的调控网络进行研究。
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公开(公告)号：CN105941155B
公开(公告)日：2018-04-20
申请号：CN201610373521.0
申请日：2016-05-31
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种利用悬浮培养技术快速繁殖水曲柳的方法，选取水曲柳种子，用酒精溶液浸泡，无菌水冲洗，放入次氯酸钠溶液中消毒，之后再用无菌水冲洗，取出成熟胚接种于种子萌发培养基中培养，7‑10d后转入液体增殖培养基中进行培养15‑20天，将侧芽切下，继续转入液体增殖培养基中培养，将健壮的苗驯化一周后移栽入灭菌处理的基质中直至幼苗成活。本发明的优点在于用悬浮培养法诱导水曲柳快繁实用技术方法简便，打破了由于种子发芽率低而造成的生产瓶颈，缩短培养周期，提高了繁殖系数，减少了组培实验过程中过多的人力和物力的消耗，从根本上提高了工作效率，节约了生产成本，并能达到工厂化育苗的目的。
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公开(公告)号：CN102943104A
公开(公告)日：2013-02-27
申请号：CN201210462075.2
申请日：2012-11-16
IPC: C12P33/00
Abstract: 本发明属于生物工程领域，具体涉及一种利用MeJA和SA提高白桦细胞中白桦酯醇和齐墩果酸含量的方法。以白桦组培苗茎段接种于NT+0.1mg/L 6-BA和0.01mg/L TDZ培养基诱导白桦愈伤组织，经多次继代、筛选和悬浮培养获得总三萜含量高的白桦悬浮细胞。将上述筛选细胞接种于相同液体培养基中，接种量为3g/100ml，震荡培养第七天分别添加100uM/L MeJA和50mg/L SA,此后24h-48h收获，检测细胞中总三萜、白桦酯醇和齐墩果酸含量。两种处理总三萜含量比对照提高21.6%~31.7%，齐墩果酸含量分别比对照提高277.41%~369.34%，白桦脂醇含量分别比对照提高44.42%~179.58%。该申请发明为解决天然植物药物来源紧缺和工业化大规模生产白桦酯醇和齐墩果酸药物提供了一种新途径。
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公开(公告)号：CN101548646B
公开(公告)日：2011-12-07
申请号：CN200910072102.3
申请日：2009-05-25
Abstract: 本发明提供了一种通过体细胞胚和次生体细胞胚发生途径快繁龙牙楤木的方法。本发明以龙牙楤木幼苗的叶子、叶柄和根段为外植体，在IBA浓度分别为3.0mg/L、2.0mg/L、0.3mg/L和2％蔗糖的SH培养中暗培养35天，三种外植体的体细胞胚诱导率都可达到100％，且平均每个外植体都产生较多的体细胞胚数(8.6-11.3个)。蔗糖浓度和IBA都可以影响次生体细胞胚的产生，在3.0mg/L IBA+2％蔗糖+SH培养基的培养条件下，中暗培养4周后，100％的体细胞胚上都有次生体细胞胚生成。将获得的成熟初生体细胞胚和次生体细胞胚转入无激素的WPM培养基中，都可迅速萌发生长为小苗。约5cm的健壮小苗移栽土壤中，成活率可达89％。本发明提供的培养简单、再生周期短、可持续获得再生植株的方法，可用于龙牙楤木苗木产业化生产。
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