公开(公告)号：CN117143826A

公开(公告)日：2023-12-01

申请号：CN202311002569.7

申请日：2023-08-09

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

Inventor： 林跃智 ,  王晓钧 ,  郭兴

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/24 ,  G01N33/68 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明公开了一种检测马IL‑1β双抗体夹心ELISA试剂盒及其应用。本发明分别使用由保藏号CGMCC No.45601和CGMCC No.45602的杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体作为捕获抗体和检测抗体，建立了双抗体夹心ELISA方法。特异性试验结果表明该方法特异性良好，与IL‑1α、IL‑1Ra、IFN‑α和SAA均不发生反应。灵敏性试验表明该方法对IL‑1β的最低检出量为143pg/mL，灵敏度为9.3pg/mL；检测范围为200‑10000pg/mL。重复性试验表明该方法变异系数均小于5％，确定该方法具有良好的重复性。通过对临床样品的检测发现，本发明建立的双抗体夹心ELISA方法与RD公司的DY3340双抗体夹心ELISA方法的检测结果基本一致，符合率为94％。本发明的提出为检测马IL‑1β提供了一种快速检测方法和监测手段。

公开(公告)号：CN116338193A

公开(公告)日：2023-06-27

申请号：CN202210879227.2

申请日：2022-07-25

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

Inventor： 胡哲 ,  王晓钧 ,  郭奎

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种基于抗体捕获的非洲马瘟间接ELISA抗体检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有特异性抗非洲马瘟病毒VP7蛋白单克隆抗体包被的酶标板，其中所述的特异性抗非洲马瘟病毒VP7蛋白单克隆抗体由杂交瘤细胞株ANSV‑VP7‑3G9分泌产生，所述的杂交瘤细胞株ANSV‑VP7‑3G9的保藏编号为CGMCC No.45157。本发明基于抗体捕获提出了一种非洲马瘟间接ELISA抗体检测试剂盒，本发明的酶标板上首先包被一种可以识别抗原的单克隆抗体，利用单克隆抗体特异性地捕获抗原，再加入血清及酶标二抗。通过单克隆抗体捕获抗原，减少非目标抗原(如大肠杆菌)与ELISA酶标板的吸附作用，从而提高方法的特异性。该方法相比普通间接ELISA的2次级联放大作用变为三次级联放大，即保留了间接ELISA方法的敏感性，又提高了特异性。

公开(公告)号：CN115128268A

公开(公告)日：2022-09-30

申请号：CN202210404918.7

申请日：2022-04-18

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

Inventor： 胡哲 ,  郭奎 ,  王晓钧 ,  郭巍 ,  刘荻萩

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N33/68 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种马流产沙门氏菌病4种致病病原菌通用型间接ELISA抗体检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有截短表达的沙门氏菌外膜重组蛋白OmpA包被的酶标板，所述的截短表达的沙门氏菌外膜重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明利用Pull down技术成功筛选到了马流产沙门氏菌病4种病原的共同优势抗原，并将其克隆到表达载体通过截短分段表达实现了对该OmpA蛋白的可溶性表达，同时建立了马流产沙门氏菌病4种致病病原菌通用型间接ELISA抗体检测试剂盒以及相应的iELISA抗体诊断方法，实验证明，使用该试剂盒建立的方法具有特异性强、敏感性高的优点，将成为马流产沙门菌病抗体检测的一种有效工具，也为未来疫苗研发的抗体监测奠定了方法学基础。

公开(公告)号：CN111088379A

公开(公告)日：2020-05-01

申请号：CN202010046938.2

申请日：2020-01-16

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

Inventor： 胡哲 ,  王晓钧

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/42

Abstract: 本发明公开了一种用于检测马流产沙门氏菌的特异性引物组及其用途。所述的引物组由上游引物以及下游引物组成，其中所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。特异性实验结果表明该引物组只与马流产沙门氏菌反应，而与其他马、驴常见传染病病原均无交叉反应，具有良好的特异性。灵敏度实验表明，该引物组检测马流产沙门氏菌的最低限度为4.7×103CFU/ml，具有良好的敏感性。本发明的提出为马流产沙门氏菌的检测或诊断提供了一种有效技术手段，通过本发明的方法，使马流产沙门氏菌的检出率极大提高，诊断更精确，对于马流产沙门氏菌病的防控具有重要意义。

公开(公告)号：CN111876476A

公开(公告)日：2020-11-03

申请号：CN202010731784.0

申请日：2020-07-27

Applicant: 暨南大学 ,  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

Inventor： 王亚玉 ,  林跃智 ,  廖化新 ,  王晓钧 ,  刘彤 ,  王雪峰

IPC: C12Q1/6876 ,  C12Q1/6848 ,  C12N15/11 ,  C12N15/85 ,  C07K16/10

Abstract: 本发明涉及基因工程及抗体制备领域，具体而言，涉及一种用于扩增马抗体的巢式PCR引物、试剂盒及其应用。该巢式PCR引物可匹配的抗体重链及轻链基因的阳性率为56％左右，进而能够从单个B淋巴细胞分离抗体基因的方法，并制备高通量马源抗体。该方法保留了轻链重链可变区的天然配对，具有基因多样性好、效价高、抗体亲和力好、特异性强、实验周期短等优势，为研制传染性疾病及自身免疫性疾病的单克隆抗体的预防与治疗性药物或诊断性抗体提供了一条广阔的途径，同时也为生命科学基础研究获得外源性蛋白的抗体提供了一个更加高效、简单、快速的方法。