一种定向筛选同源重组PGC的载体及构建方法和应用

    公开(公告)号:CN103397046A

    公开(公告)日:2013-11-20

    申请号:CN201310341471.4

    申请日:2013-08-06

    Abstract: 本发明公开了一种定向筛选同源重组PGC的载体及制备方法和应用,将表达框UAS:mRFP-UTRnos1和表达框UAS:puma-UTRnos1串联构建出一种可定向筛选同源重组PGC的载体p(UAS:mRFP,UAS:puma),其序列为SEQIDNO.1所示。该载体具有荧光特异高效标记PGC的作用,又具有促凋亡基因特异剔除PGC的作用。以p(UAS:mRFP,UAS:puma)为载体骨架,将打靶基因同源序列的左右臂分别置于表达框UAS:mRFP-UTRnos1的两侧,并且使表达框UAS:puma-UTRnos1位于同源序列的外侧,制备出同源重组载体。在Tg(kop:KalTA4)胚胎中导入同源重组载体,挑选出在PGC中表达mRFP的胚胎,即为在生殖细胞中发生了同源重组的胚胎。

    培育快速生长转基因动物的方法

    公开(公告)号:CN1217384A

    公开(公告)日:1999-05-26

    申请号:CN97109306.7

    申请日:1997-11-17

    Abstract: 生物的生长是一个复杂的过程,受到多种基因产物影响,因此,通过转移单一生长激素基因的方法,难以实现动物生长性状的改良目的。本发明采用协同基因同步转移方法,将脊椎动物生长调节中的两个重要因子-生长激素和胰岛素样生长因子的重组基因同时导入受体动物受精卵中,外源基因在染色体中的整合、表达,在其产物的协同作用下,促进转基因动物个体的生长。

    利用合成基因在酵母菌中生产草鱼生长激素的方法

    公开(公告)号:CN1216320A

    公开(公告)日:1999-05-12

    申请号:CN97109295.8

    申请日:1997-11-05

    Abstract: 根据天然草鱼生长激素多肽的氨基酸顺序,设计了适合其在酵母表达的DNA编码顺序,采用PCR技术完成了草鱼生长激素基因人工合成。在此基础上,将此基因克隆在酵母基因表达系统,使之与酵母染色质DNA整合,并筛选高基因拷贝和高表达的酵母株。该菌株表达的草鱼生长激素占酵母细胞总蛋白的12%,经氨基酸顺序分析表明酵母所生产的草鱼生长激素多肽与天然多肽相同,该基因表达水平持续稳定,可应用于渔业和提高水产养殖效益。

    一种鲟鱼CRISPR/Cas9基因编辑方法

    公开(公告)号:CN107974466B

    公开(公告)日:2020-09-29

    申请号:CN201711282089.5

    申请日:2017-12-07

    Abstract: 本发明提供了一种鲟鱼CRISPR/Cas9基因编辑方法,是将Cas9蛋白与靶基因gRNA混合后,利用显微注射的方式,注射到受精时间不超过20分钟的鲟鱼1细胞期受精卵的动物极的受精孔中。将100 ng/µL Cas9 nuclease蛋白与30 ng/µL gRNA混合,采用显微注射方法,将混合物导入小体鲟1细胞期受精胚的动物极,孵化后可获得靶基因突变率高达83.1%的小体鲟胚胎,从而建立小体鲟靶基因精准编辑技术。靶基因发生突变的小体鲟胚胎可通过PAGE方法筛选获得。该技术既可以用于研究鲟鱼基因的功能,又可以用于精准修饰鲟鱼内源靶基因,培育遗传改良的鲟鱼养殖新品系。

    一种鲟鱼TALEN基因编辑方法

    公开(公告)号:CN108034675A

    公开(公告)日:2018-05-15

    申请号:CN201711282301.8

    申请日:2017-12-07

    Abstract: 本发明公开了一种鲟鱼TALEN基因编辑方法,包括将靶基因质粒和针对靶位点的TALEN mRNA混合后,利用显微操作的方式注射到受精时间不超过20分钟的鲟鱼1细胞期受精卵动物极的受精孔中,将靶基因质粒和针对靶位点的TALEN mRNA按1:3浓度比例混合后,采用显微注射方法按100 ng/µL质粒浓度导入小体鲟1细胞期的受精胚中,可以获得存活率74%,外源靶基因突变率高达93%的小体鲟胚胎,本发明第一次建立鲟鱼外源基因精准编辑技术,为开展鲟鱼基因的功能研究和鲟鱼养殖品种的遗传改良提供了强有力的技术手段。

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