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公开(公告)号：CN113265435A
公开(公告)日：2021-08-17
申请号：CN202110667590.3
申请日：2021-06-16
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及基因工程与生物化学技术领域，具体为一种运用同一种细菌源重组生物酶催化生成三种第二信使分子，即环二核苷酸c‑di‑GMP、c‑di‑AMP和3′3′‑cGAMP的方法。所述重组生物酶为重组霍乱弧菌二核苷酸环化酶DncV，即重组DncV酶。DncV的氨基酸序列如序列表的序列1所示。本发明利用基因工程学技术首先制备可溶性表达的重组霍乱弧菌二核苷酸环化酶DncV，然后利用生物化学方法以ATP、GTP或ATP和GTP为底物，该生物酶分别催化合成高活性、专一性的c‑di‑GMP、c‑di‑AMP或3’3’‑cGAMP，提供简单快速、成本低廉、条件温和、产率高以及可大规模生产三种CDNs的制备方法；同时提供一种能够鉴定重组DncV酶及其催化产物c‑di‑GMP、c‑di‑AMP或3’3’‑cGAMP生物学活性的方法。
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公开(公告)号：CN113082049A
公开(公告)日：2021-07-09
申请号：CN202110442821.0
申请日：2021-04-23
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A61K33/18 , A61P31/20 , A61K31/4155
Abstract: 本发明属于非洲猪瘟治疗技术领域，具体涉及碘化钾或含有碘化钾的组合物用于预防或治疗非洲猪瘟的新用途。本发明意外发现，碘化钾(KI)能够抑制非洲猪瘟病毒蛋白p72和p30的表达，抑制非洲猪瘟病毒基因拷贝数和病毒滴度，能够抑制ASFV的复制和感染，用于预防或治疗非洲猪瘟；同时，本发明发现，碘化钾(KI)联合ML‑60218能够显著抑制非洲猪瘟病毒蛋白p30、p72的表达，阻止病毒入侵宿主细胞，可用于抑制ASFV感染的整个时期；并且碘化钾(KI)联合ML‑60218能够显著抑制非洲猪瘟病毒的复制，降低非洲猪瘟病毒感染后的病毒滴度，可作为非洲猪瘟病毒的抑制剂，用于预防或治疗非洲猪瘟。
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公开(公告)号：CN112057611B
公开(公告)日：2021-04-20
申请号：CN202010932707.1
申请日：2020-09-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及非洲猪瘟病毒E120R蛋白作为免疫抑制剂的应用及免疫抑制位点敲除毒株的构建。本发明首先发现了非洲猪瘟病毒E120R蛋白能够抑制cGAS/STING和poly(dA:dT)诱导的IFN‑β的激活，抑制cGAS/STING和poly(dA:dT)诱导的IFN‑β及其下游因子ISG56和ISG15的mRNA表达，抑制cGAS/STING和poly(dA:dT)诱导的IRF3的磷酸化，具有较强的免疫抑制作用，可作为免疫抑制剂应用；其次本发明发现了非洲猪瘟病毒E120R蛋白的免疫抑制位点，并通过基因工程手段构建获得了E120R蛋白的免疫抑制位点敲除的非洲猪瘟重组病毒，所述非洲猪瘟重组病毒的天然免疫的能力显著增强，可作为重组疫苗株，能够促进早期免疫应答，诱导高水平抗体产生，提高了生物安全性，及免疫保护效力，具备良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN112592401A
公开(公告)日：2021-04-02
申请号：CN202011452599.4
申请日：2020-12-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11及其制备方法。ScFv抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，ScFv抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至PET‑30a载体，转化BL21（DE3）感受态细胞，筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11，对筛选得到的ScFv抗体VH‑VLλ11进行初步活性鉴定发现此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN110624100B
公开(公告)日：2021-03-16
申请号：CN201910839428.8
申请日：2019-09-06
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物医药领域，具体涉及口蹄疫病毒3D蛋白作为TLR3通路激活剂的应用。本发明发现口蹄疫病毒3D蛋白不仅能够促进poly（I:C）诱导的TLR3通路的激活，而且自身也可以在无poly（I:C）条件下促进TLR3通路的激活；并且，本发明发现口蹄疫病毒3D蛋白能够促进TLR3蛋白水平的增加，可用于制备与poly（I:C）功能类似的干扰素诱导的相关药物，从而在无poly（I:C）条件下促进TLR3通路的激活。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112481220A
公开(公告)日：2021-03-12
申请号：CN202011206761.4
申请日：2020-11-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N5/20 , C07K16/40 , C07K16/08 , C12P21/08 , G01N33/577 , G01N33/569 , A61K39/42 , A61P31/20
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，涉及抗非洲猪瘟病毒解旋酶D1133L的单克隆抗体以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本发明采用小鼠腹腔培养和体外细胞培养杂交瘤细胞7D12制备单克隆抗体，效价测定检测结果表明，本发明杂交瘤细胞株7D12所分泌的单克隆抗体诱导小鼠产生的腹水抗体效价为107，杂交瘤细胞培养上清的效价达到1:1280。本发明制备的单克隆抗体为研究ASFV解旋酶功能及其分子机制积累了关键性的生物学材料，基于该单克隆抗体本身生物学特性建立的间接免疫荧光抗原检测方法为ASFV精准、快速诊断提供了支撑，本发明制备的单克隆抗体能显著抑制或者阻断ASFV复制为ASFV预防和治疗提供了可能的产品支持。
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公开(公告)号：CN112159814A
公开(公告)日：2021-01-01
申请号：CN202011187615.1
申请日：2020-10-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/117 , A61K39/39 , A61K39/135 , A61P31/14 , A61P37/04
Abstract: 本发明公开了一种含CpG寡聚脱氧核苷酸复合佐剂的制备及其用途。本发明提供了序列为SEQ ID No.1的CpG寡聚脱氧核苷酸，且所有核苷酸均为硫代修饰。本发明的CpG寡聚脱氧核苷酸具有增强B细胞增殖和ThΙ型免疫反应的能力；硫代修饰延长了其在体内的滞留时间，降低了各种水解酶对其的水解作用；制备方法简单，质量易于控制，易于规模化生产；安全性好，毒副作用低。本发明提供了含CpG寡聚脱氧核苷酸复合佐剂的制备方法，CpG寡聚脱氧核苷酸与油乳剂ISA 206按一定比例混合、乳化而成，工艺简单，性能稳定。本发明提供的含CpG寡聚脱氧核苷酸复合佐剂，可促进抗体的提前产生并具有强烈的免疫增强作用。
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公开(公告)号：CN111925416A
公开(公告)日：2020-11-13
申请号：CN202010871934.8
申请日：2020-08-26
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明提供了一类促进猪机体产生广谱获得性免疫应答的多肽及其应用，属于生物医药技术领域；所述多肽包括第一多肽、第二多肽、第三多肽、第四多肽和第五多肽中的一种或几种；所述第一多肽、第二多肽、第三多肽、第四多肽和第五多肽的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5所示。本发明的多肽能够高水平促进健康猪机体的单核巨噬细胞增殖，显著促进健康猪机体的CD8+T细胞及B细胞分泌IFN-γ从而增强猪机体产生广谱获得性免疫应答，能够作为猪病疫苗的有效组分或者疫苗免疫增强剂。
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公开(公告)号：CN111040031B
公开(公告)日：2020-11-03
申请号：CN201911283478.9
申请日：2019-12-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗非洲猪瘟病毒ScFv抗体及其制备方法，本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离到的淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列连接至PET‑30a载体，然后转化BL21感受态细胞，从转化后的单个菌落中筛选得到针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体，采用ELISA试验对筛选得到的ScFv抗体进行初步活性鉴定，表明此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN110628698B
公开(公告)日：2020-10-16
申请号：CN201910935029.1
申请日：2019-09-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明提供了一种使用悬浮细胞系制备塞内卡病毒的方法，所述方法包括如下步骤：(1)将非悬浮BHK‑21细胞系驯化为悬浮BHK‑21‑S细胞系；(2)使用步骤(1)得到的悬浮BHK‑21‑S细胞系培养制备塞内卡病毒。本发明通过采用驯化得到的悬浮BHK‑21‑S细胞系进行塞内卡病毒的培养，有效提高了所得病毒的产能，为规模化大量生产塞内卡疫苗奠定了基础。
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