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公开(公告)号：CN104099253B
公开(公告)日：2016-07-06
申请号：CN201410329652.X
申请日：2014-07-11
Applicant: 江南大学 , 江苏国信协联能源有限公司
Abstract: 一种基于菌丝球分散技术的柠檬酸黑曲霉种子连续培养方法，包括以下步骤：（1）将黑曲霉孢子液接种至种子培养基，培养制备成熟的种子液；（2）成熟的种子液经过分散器处理，得到分散菌丝种子液；（3）将步骤（2）得到的部分分散菌丝种子液以5~15%接种量转接至发酵培养基发酵，当发酵培养基还原糖浓度低于0.5%时发酵结束；（4）将步骤（2）得到的部分分散菌丝种子液以5~15%接种量接种至种子培养基，培养制备得到下一级成熟的种子液，然后回到步骤（2），即实现黑曲霉种子连续培养。本发明提供的黑曲霉种子连续培养方法，能直接减少黑曲霉孢子繁琐的培养过程，同时可以有效缩短成熟种子培养时间，提高原料利用率。
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公开(公告)号：CN104109697B
公开(公告)日：2016-06-15
申请号：CN201410321671.8
申请日：2014-07-08
Applicant: 江南大学 , 江苏国信协联能源有限公司
Abstract: 柠檬酸废水回流发酵生产柠檬酸的方法：（1）淀粉质原料与柠檬酸废水混合均匀，加入高温α-淀粉酶；（2）将混合液经两次喷射，经碘试合格得到液化混液；再将液化混液经过板框压滤得到液化清液；（3）将液化清液与液化混液混合，加入柠檬酸废水进行补水得到种子培养基，进行菌种的种子培养；（4）将液化清液与液化混液混合，加入柠檬酸废水进行补水得到发酵营养液，进行发酵培养；（5）发酵结束后经固液分离除去菌体，经氢钙法或色谱法提取得到柠檬酸，产生的废水回到步骤（1）和步骤（3）、（4），如此循环。本方法发酵稳定且与原工艺技术水平相当，节约了工艺用水和蒸汽用量，节省了污水处理成本，具有重要的环境效益、经济效益。
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公开(公告)号：CN105586366A
公开(公告)日：2016-05-18
申请号：CN201610135591.2
申请日：2016-03-10
Applicant: 江南大学 , 江苏国信协联能源有限公司
Abstract: 本发明公开一种基于控制菌丝体结构改善柠檬酸发酵性能的方法，包括：将培养成熟的黑曲霉孢子配制成孢子悬液，接种至种子培养基进行种子培养；在种子培养过程中，提高搅拌转速扰动孢子萌发与菌丝缠绕过程，获得成熟种子液；将上述成熟种子液接种至发酵培养基进行发酵培养，结束发酵；所述提高搅拌速度扰动的工艺是在所述种子培养进行6~20h启动的。本发明可获得有利于柠檬酸合成的特定结构菌丝体形态，改善发酵性能，提高柠檬酸产量，同时可降低孢子使用量，降低生产成本，简单易行，具有重要的经济效益和广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN105543112A
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201610122783.X
申请日：2016-03-04
Applicant: 江苏国信协联能源有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种黑曲霉种子培养方法，通过在培养过程中对产酸速率、耗葡萄糖速率或糖化酶活力中的监控来选择移种的时机；并具体公开了产酸速率、耗葡萄糖速率或糖化酶活力中的测定方法和披露了溶氧浓度对培养过程的影响，解决了现有培养方法中主要依靠观察黑曲霉菌球大小、形态来判断种子的生长状态的不足。本发明的方法培养的种子发酵结果标准差更小，批次间更稳定，发酵转化率提高，发酵周期明显缩短。
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公开(公告)号：CN104087624A
公开(公告)日：2014-10-08
申请号：CN201410329786.1
申请日：2014-07-11
Applicant: 江南大学 , 宜兴协联生物化学有限公司
Abstract: 一种黑曲霉连续发酵生产柠檬酸的方法，包括以下步骤：（1）黑曲霉经过逐级扩大培养，获得成熟的孢子；（2）孢子液接种至种子培养基，培养成为成熟的种子液；（3）成熟的种子液转接至发酵培养基F1；（4）发酵培养后，分割发酵液为两部分；其中一部分发酵液继续发酵完毕，获得柠檬酸；（5）分割出的另一部分发酵液经分散器分散处理，获得分散菌丝的发酵液；（6）将分散菌丝发酵液接入发酵培养基F2；发酵培养后，回到步骤（4），如此重复实现连续发酵。本发明显著降低生产成本与运行成本，显著缩短生产周期，提高生产效率；同时提高设备利用率，降低劳动强度，过程简便易操作，可以广泛应用于柠檬酸的生产。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102586128B
公开(公告)日：2014-04-09
申请号：CN201210066444.6
申请日：2012-03-14
Applicant: 江南大学 , 宜兴协联生物化学有限公司
Abstract: 本发明公开了一种通过强化丙酮酸羧化途径促进α-酮戊二酸积累的方法，将来源于米根霉(Rhizopus oryzae)中编码丙酮酸羧化酶的基因RoPYC2过量表达于发酵法生产α-酮戊二酸的菌株Yarrowia lipolytica WSH-Z06中，获得了一株丙酮酸羧化酶活性提高的重组菌，其丙酮酸羧化酶活性提高了10.2倍(达到0.87U/mg protein)；以甘油为唯一碳源，发酵144h后，α-酮戊二酸产量达到47.2g/L，是出发菌株的1.3倍；丙酮酸产量降低到10.4g/L，是出发菌株的49.0％。本发明通过调控三羧酸循环的回补途径，成功实现了碳代谢流从丙酮酸节点流向α-酮戊二酸节点，在提高α-酮戊二酸产量的同时，减少了副产物-丙酮酸的生成。为今后利用代谢工程手段改造菌株促进目标产物过量积累提供了一定的借鉴意义。
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公开(公告)号：CN113604365B
公开(公告)日：2023-09-15
申请号：CN202111026526.3
申请日：2021-09-02
Applicant: 江南大学 , 江苏国信协联能源有限公司
Abstract: 本发明公开了一种超声波控制菌丝球粒径的方法及其应用。本发明所述方法包括如下步骤：(1)种子培养基的制备；(2)将步骤(1)制备的种子培养基灭菌、冷却后，接入曲霉孢子，培养得到含曲霉菌丝球的种子液；(3)对步骤(2)含曲霉菌丝球的种子液进行超声处理，得到含不同粒径的菌丝球的种子液；将含不同粒径菌丝球的种子液加入发酵培养基中搅拌发酵得到柠檬酸发酵液。本发明方法有利于柠檬酸发酵实现高浓度、高转化率和高效率的统一，对柠檬酸产业技术提升具有重要促进作用。
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公开(公告)号：CN109055444B
公开(公告)日：2020-06-05
申请号：CN201810986196.4
申请日：2018-08-28
Applicant: 江苏国信协联能源有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公布了一种黑曲霉种子连续培养的方法，所述方法包括如下步骤：(1)启动阶段，将黑曲霉孢子接种至种子培养基，得到种子液；(2)种子连续培养阶段，对步骤(1)得到的种子液进行连续分散处理，分散得到的种子液进行连续培养，并同时补充新鲜种子补料培养基；(3)停止阶段，停止补充新鲜种子补料培养基和分散处理，继续培养得到种子液，移入发酵培养基进行发酵培养。本发明方法突破性解决了多细胞丝状菌生长缓慢，以及菌丝球在连续培养中容易流失的问题，完全实现了种子连续培养，使菌体恒定在最适的生长环境中，避免了菌种退化，使种子液处于连续稳定的高活力状态，对应发酵产柠檬酸的性能提高。
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公开(公告)号：CN104087624B
公开(公告)日：2017-08-08
申请号：CN201410329786.1
申请日：2014-07-11
Applicant: 江南大学 , 江苏国信协联能源有限公司
Abstract: 一种黑曲霉连续发酵生产柠檬酸的方法，包括以下步骤：（1）黑曲霉经过逐级扩大培养，获得成熟的孢子；（2）孢子液接种至种子培养基，培养成为成熟的种子液；（3）成熟的种子液转接至发酵培养基F1；（4）发酵培养后，分割发酵液为两部分；其中一部分发酵液继续发酵完毕，获得柠檬酸；（5）分割出的另一部分发酵液经分散器分散处理，获得分散菌丝的发酵液；（6）将分散菌丝发酵液接入发酵培养基F2；发酵培养后，回到步骤（4），如此重复实现连续发酵。本发明显著降低生产成本与运行成本，显著缩短生产周期，提高生产效率；同时提高设备利用率，降低劳动强度，过程简便易操作，可以广泛应用于柠檬酸的生产。
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公开(公告)号：CN104789635B
公开(公告)日：2017-05-03
申请号：CN201510224891.3
申请日：2015-05-05
Applicant: 江南大学 , 江苏国信协联能源有限公司
Abstract: 一种黑曲霉麸曲孢子活力的评价方法：(1)取培养成熟的黑曲霉麸曲孢子，用磷酸缓冲液清洗，过滤，获得黑曲霉麸曲孢子悬液；(2)添加0.05％(v/v)的吐温80，超声波处理，获得分散均匀的单孢子悬液，调节孢子悬液浓度为106～107个/mL；(3)用磷酸缓冲液配置8～14mg/L浓度的亚甲基蓝溶液；(4)将步骤(2)与(3)的溶液按照v/v为1:1的比例于比色皿中混合均匀密封，反应420s，于663nm波长处扫描吸光度‑时间曲线；(5)测定反应体系初始与反应结束的吸光度，以吸光度的变化表征细胞活力大小。本发明可以有效缩短成熟种子培养时间，提高原料利用率；其它微生物孢子活力评价，均适用本技术。
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