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公开(公告)号：CN104450878A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201410336366.6
申请日：2014-07-14
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6858 , C12Q2531/113 , C12Q2537/143
Abstract: 本发明甜瓜聚合基因7198双重SSR-PCR体系的建立，属于生物技术育种领域，专用于甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-1与Gsb-4的聚合育种。通过同时添加引物CMCT505和CMTA170a，并调整DNTPs、Buffer与模板DNA的浓度及退火温度等，设计各影响因素的正交试验，通过对双亲后代F1以及单一PCR体系扩增筛选到的聚合基因幼苗DNA进行鉴定，建立了可以同时扩增出189bp和121bp两个目的条带的双重SSR-PCR体系。该双重PCR体系具有节省时间、降低成本、提高效率的优点，特别是节省珍贵的实验材料。对甜瓜乃至整个蔬菜作物的聚合育种实践和理论研究具有重要的借鉴意义。
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公开(公告)号：CN104419763A
公开(公告)日：2015-03-18
申请号：CN201310409784.9
申请日：2013-09-11
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6841 , C12Q2543/10 , C12Q2531/113
Abstract: 本发明公开了黄瓜单拷贝基因在染色体上物理定位的方法，它是通过PCR扩增获得黄瓜单拷贝基因，然后对产物进行凝胶电泳回收纯化，以纯化产物为模板进行第二次PCR扩增，然后将第二次PCR产物标备探针。分别取黄瓜根尖和盛花期植株上的花蕾进行酶解，涂片法制片，挑选分散度高的片子，并进一步进行胃蛋白酶处理后，备用。最后将标好的探针杂交到处理好的载玻片上，在荧光显微镜下观察信号。本发明采用PCR扩增后切胶回收，之后再进行二次PCR扩增的方法，不仅可以去除基因组DNA的干扰，而且解决了切胶回收率低的问题；另外涂片法结合胃蛋白酶处理制作背景清晰且分散度高的片子可以提高信号的分辨率；通过此方法，可在染色体上直接检测到的最短长度为2kb的单拷贝基因，为黄瓜的细胞遗传学研究提供了可靠的保证。
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公开(公告)号：CN103114151A
公开(公告)日：2013-05-22
申请号：CN201310081001.9
申请日：2013-03-14
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种荧光原位杂交的方法，以黄瓜减数分裂粗线期染色体为靶DNA进行多探针的荧光原位杂交。精选染色体分散良好且形态结构清晰的高质量制片，在80℃的70％去离子甲酰胺中变性，梯度酒精中脱水干燥；采用碱裂解法提取目标质粒DNA，利用缺刻平移法进行标记，配制杂交混合液，90℃变性后，加到载玻片上使靶DNA与探针进行杂交，最后进行信号检测。本发明的荧光原位杂交技术，可用于黄瓜染色体物理图谱的绘制，由于其一次性可加入多个探针，避免了对一张制片多次重复杂交，大大提高了实验效率。本发明在配置杂交混合液的过程中加入了适量的黄瓜全基因组DNA和Cot-1DNA，用于封阻杂信号和重复序列信号，提高了靶信号的辨识率，增加了实验结果的准确性。
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公开(公告)号：CN102845300A
公开(公告)日：2013-01-02
申请号：CN201210254561.5
申请日：2012-07-23
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明的甜瓜蔓枯病抗性基因聚合方法及其鉴定专用于甜瓜抗蔓枯病聚合抗源筛选以及抗蔓枯病标记辅助聚合育种研究。两个抗蔓枯病材料PI420145和PI482398杂交、后代连续自交得到抗蔓枯病基因稳定遗传的F4，F4聚合了PI420145和PI482398的抗蔓枯病基因，且聚合后抗源的聚合抗源的抗性增强，抗性高于亲本。PI420145和PI482398杂交及自交后代F4聚合双亲的蔓枯病抗性基因，该抗源的蔓枯病抗性基因与AFLP标记EcoRI-TG/MseI-CTC200，EcoRI-AT/MseI-CTG90，EcoRI-TC/MseI-CAG60连锁，同时SSR标记CMAT170a连锁。通过本发明提供的甜瓜蔓枯病抗性基因聚合及其鉴定方法，获得聚合基因材料，其抗性高于单一抗源，大大提高抗蔓枯病甜瓜的选择效率，在甜瓜抗蔓枯病育种中，该聚合抗源可做为供体亲本，能够加速甜瓜抗蔓枯病育种进程。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117660688A
公开(公告)日：2024-03-08
申请号：CN202311758435.8
申请日：2023-12-20
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/682 , C12Q1/6841 , C12N15/11
Abstract: 本发明提供了一种基于信号增强的单倍型寡核苷酸涂染方法及其应用，属于分子细胞遗传技术领域。首先开发植物单倍型寡核苷酸，并对其进行重构，具体由基因组序列、两侧35bp增强序列以及亚文库特异序列构成，合成的双链DNA寡核苷酸探针通过招募荧光团修饰的二级寡核苷酸，增加荧光团数目从而实现FISH信号增强。本发明具有高度的可及性和突出的适用性，不仅能够降低探针设计密度和合成成本，同时能极大地增强荧光信号强度和提高识别分辨率。本发明可利用极少数目的寡核苷酸探针实现对小片段或单基因的定位、渐渗片段的鉴定及小基因组植物的同源染色体的可视化识别，极大地提高精准育种中对于重大目标性状相关片段或基因的定位和筛选效率。
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公开(公告)号：CN112322769B
公开(公告)日：2022-02-18
申请号：CN202011301724.1
申请日：2020-11-19
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种与黄瓜多表皮毛性状相关的SNP分子标记及其应用，所述SNP分子标记是以‘Chinese Long v2’黄瓜基因组数据库中的Chr6:27397366位点前后各400bp的DNA序列为模板设计引物，扩增得出的基因组序列如SEQ ID NO:1所示，自5’端起，在该序列的第401位存在A/C多态性，即SNP位点。本发明分子标记与黄瓜多表皮毛基因紧密连锁，可靠且检测快捷，可用于黄瓜多表皮毛相关性状的定向遗传育种。对于加快黄瓜品种的遗传改良进程，提高育种选择效率具有重要的理论和实践指导意义。
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公开(公告)号：CN110195125A
公开(公告)日：2019-09-03
申请号：CN201910605499.1
申请日：2019-07-05
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11 , A01H1/02 , A01H1/04
Abstract: 本发明公开了黄瓜单性结实主效QTL Parth2.1的连锁分子标记及其应用。黄瓜单性结实主效QTL Parth2.1的连锁分子标记Indel-16Y-46，其上游引物:SEQ ID NO.1,下游引物:SEQ ID NO.2。本发明所述的分子标记在全雌强单性结实黄瓜新品种分子标记辅助育种中的应用。利用本发明分子标记对Parth2.1位点选择效率为100％。基于该分子标记开发了一种全雌强单性结实黄瓜新品种的分子标记辅助育种方法，获得的全雌强单性结实的黄瓜新品种是欧洲温室型黄瓜自交系品种，有较高的产量和优良的果实品质，可直接作为改良其他品种单性结实性和全雌性的骨干亲本。
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公开(公告)号：CN109601367A
公开(公告)日：2019-04-12
申请号：CN201811487242.2
申请日：2018-12-06
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H1/02 , A01H1/04 , C12Q1/6895
Abstract: 本发明公开了抗霜霉病黄瓜种间杂种新品种的培育方法及应用。该培育方法包括以‘长春密刺’的高代自交系CCMC为母本，以黄瓜-酸黄瓜渐渗系材料IL52为父本，进行杂交获得F1，杂种F1自交获得F2，并继续通过单粒传的方式构建F6重组自交系；通过对重组自交系群体进行4年的田间成株期霜霉病自然发病表型统计，筛选出抗性高且果实商品性较好的重组单株；利用回交及分子标记辅助选择获得dm5.2区段内基因型与IL52带型一致，而其他染色体区段为‘长春密刺’带型的单株即为抗霜霉病黄瓜种间杂种新品种。新品种具有高抗霜霉病性状和较高的产量和优良的果实品质。
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公开(公告)号：CN108624710A
公开(公告)日：2018-10-09
申请号：CN201810647470.5
申请日：2018-06-19
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明提供了与黄瓜果实长度性状相关的SSR标记及其应用，属于植物分子育种领域。首次公开了与黄瓜果实长度基因紧密连锁的分子标记SSR05572，该标记正反向引物序列分别为：5′GCAAACCATAAGTTTCCCCA 3′和5′GATCGATATTGCAACGAATTACA3′。在长瓜品种黄瓜与短瓜品种黄瓜构建的BC4-S2中，引物SSR05572F/SSR05572R在长瓜株系中均能扩增出204bp产物，在短瓜株系中均能扩增出191bp产物，在杂合株系中能扩增出同时含有204bp和191bp两条带的产物，与果实长度基因紧密连锁。本发明公开的与黄瓜果实长度基因紧密连锁分子标记，可用于黄瓜果实长度基因定位或分子标记辅助育种。对于加快黄瓜品种的遗传改良进程，提高育种选择效率具有重要的理论和实践指导意义。
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