一种感染柯萨奇病毒A16型的小鼠模型及其构建方法

    公开(公告)号:CN119842818A

    公开(公告)日:2025-04-18

    申请号:CN202510326520.X

    申请日:2025-03-19

    Abstract: 本发明公开一种感染柯萨奇病毒A16型的小鼠模型及其构建方法,具体步骤为把Rosa26位点的左同源臂LHA连接到质粒pCAG‑GFP‑N1上,成功构建出质粒pCAG‑GFP‑N1‑Rosa26 LHA。然后使用高保真酶PCR扩增Rosa26‑RHA和hSCARB2片段以及wpre‑polyA片段;再使用Hind3进行酶切并回收大片段作为连接载体备用,最后使用Gibson Assembly一步法将三个片段成功构建到载体上,即获得我们所需要的目的载体:pmRosa26‑CAG‑hSCARB2。然后将目的载体和靶向sgRNA、Cas9 mRNA混合,共注射于C57小鼠受精卵中,随后移植入假孕ICR母鼠的输卵管,最终获得hSCARB2定点(Rosa26)敲入小鼠。通过颅内注射CVA‑16病毒,其结果证实该敲入鼠在10日龄,21日龄、30日龄均能成功感染CVA‑16病毒,并且该模型首次出现了后肢麻痹及死亡等严重现象,为疫苗评价和药物筛选提供了一个有力的工具。

    一种物理性去除卵母细胞透明带的方法

    公开(公告)号:CN111004775B

    公开(公告)日:2023-05-02

    申请号:CN202010019282.5

    申请日:2020-01-08

    Abstract: 本发明公开一种物理性去除卵母细胞透明带的方法,将待去除透明带的卵母细胞置于显微操作液微滴中,吸取无菌生理盐水或者无菌PBS溶液至注射针尖端内腔中,使卵母细胞、持卵针和注射针处于同一水平线的位置,预设显微注射仪在清洗模式下的注射压力和平衡压力,使卵子固定于持卵针前端,将注射针刺入卵母细胞透明带,按清洗按钮,溶液快速注入到卵母细胞的卵周间隙,致使卵母细胞的胞质从注射针刺穿的透明带孔中跃出,即得到去除透明带的卵母细胞。本发明去透明带快,效率高,去透明带后完整光滑,能较好保持卵母细胞活性,避免了酶对卵母细胞的影响。

    全身性过表达人源α-Syn-NLS转基因鼠的构建方法

    公开(公告)号:CN115836667A

    公开(公告)日:2023-03-24

    申请号:CN202211624399.1

    申请日:2022-12-16

    Abstract: 本发明公开一种全身性过表达人源α‑Syn‑NLS转基因鼠的构建方法,本发明方法首先通过PCR方法获取人源α‑Syn编码序列和SV40核易位信号序列,再通过BP反应构建含有目的序列的入门克隆载体,酶切后,通过LR反应将入门克隆载体构建成含有目的序列的重组表达载体,再酶切后,以慢病毒LV过表达载体pLV‑EGFP:T2A:Puro‑EF1A为骨架载体,将含有目的序列的重组表达载体pDown‑hSNCA/SV40NLS构建入慢病毒载体中,进行病毒包装纯化得到过表达核输入α‑Syn的pLV病毒,采用受精卵原核注射方法注射该病毒,获得全身过表达核输入人源α‑Syn蛋白的转基因鼠,能长期稳定的过表达α‑Syn,并同时解决核输入的问题,该模型对研究α‑Syn核输入的全面功能和机制具有重要的价值。

    一种食蟹猴的未成熟卵母细胞和胚胎的体外培养液及其应用

    公开(公告)号:CN115161267A

    公开(公告)日:2022-10-11

    申请号:CN202210993447.8

    申请日:2022-08-18

    Abstract: 本发明公开一种食蟹猴的未成熟卵母细胞和胚胎的体外培养液及其应用,在商品化的基础培养液TL‑FERT中添加组合营养添加剂FBS+猴血清+100×非必须氨基酸+50×必须氨基酸,取出未成熟卵母细胞放置其中培养,培养液上方添加矿物油,于培养箱中培养即可。与先前研究的培养液为成熟卵母细胞发育效果相比,本发明的未成熟卵母细胞体外成熟率及ICSI后的受精率和优质胚胎率都有显著提高,证明了食蟹猴未成熟卵母细胞的再利用价值。本发明是一种有效、经济、简便的卵母细胞及胚胎培养方法,可推广至非人灵长类其它动物的未成熟卵母细胞及胚胎培养中,获得更多可移植用的胚胎及子代动物。

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