公开(公告)号：CN101475929A

公开(公告)日：2009-07-08

申请号：CN200910071296.5

申请日：2009-01-19

Applicant: 东北林业大学 ,  詹亚光

Inventor： 詹亚光 ,  范桂枝 ,  尹静 ,  王博 ,  由香玲 ,  齐凤慧 ,  曾凡锁

IPC: C12N5/04 ,  C12P7/40

Abstract: 一种利用白桦悬浮培养生产齐墩果酸的方法。该方法是以白桦成树一年生枝休眠芽、展叶芽和种子为材料，接种于WPM+6－BA 1mg/L培养基中获得白桦无菌苗，再以无菌苗茎段和叶片为外植体，在培养基IS上诱导获得稳定、快速生长的愈伤组织，最后在B5培养基，激素为0.1～0.4mg/L6－BA和0.01～0.1mg/L TDZ的培养基中进行悬浮细胞系的培养，蔗糖为20g/L，pH值为6.0～6.5，接种量鲜重为30～50g/L。23～25℃，110～130转/min，光照8～10h/d，光照强度1400～1700Lx，15天继代1次，多次继代培养后获得稳定的白桦悬浮培养细胞系。经高效液相色谱法检测，获得的白桦恳浮培养细胞中齐墩果酸含量可达到0.217～0.714mg/g(干重)。本发明是第一次在白桦植物中通过细胞工程方法生产齐墩果酸，此方法周期短，成本低，能节省大量人力、物力、提高劳动生产率，为解决天然植物药物来源紧缺和工业化大规模生产齐墩果酸药物提供了一种新途径。

公开(公告)号：CN101210231A

公开(公告)日：2008-07-02

申请号：CN200710144877.8

申请日：2007-12-20

Applicant: 东北林业大学 ,  詹亚光 ,  齐凤慧

Inventor： 詹亚光 ,  董杰 ,  齐凤慧 ,  曾凡锁 ,  范桂枝 ,  由香玲 ,  李淑娟

IPC: C12N5/04 ,  C12P7/42

Abstract: 本发明提供了一种生产没食子酸的茶条槭悬浮培养细胞。其特征在于将适量的茶条槭愈伤组织接种于WPM+TDZ0.002－0.01mg/L+6－BA0.05－0.15mg/L固体培养基中继代培养，15－20天1继代。选择长势好的愈伤组织转入3倍的大量元素WPM液体培养基中，激素为TDZ0.002－0.010mg/L和6－BA0.05－0.15mg/L，蔗糖为2－3％，pH值为5.8－6.0，接种量鲜重为20－40g/L。23－25℃，110－130转/min，光照8－10h/d，光照强度1400－1700Lx，7－15天1继代，20－30天为一周期，1个周期后收集细胞。鲜重达478.2g/L，干重可达22.3g/L，没食子酸含量达2.29％，没食子酸产量0.51g/L，一年可收获6.1227g/L。本发明是第一次在茶条槭植物中能通过细胞工程方法高产没食子酸的悬浮细胞。解决了没食子酸生产上的原料问题，易操作，周期短，成本低，能节省大量人力、物力、提高劳动生产率，进而保护环境，保护茶条槭植物资源。

公开(公告)号：CN116965337A

公开(公告)日：2023-10-31

申请号：CN202311225996.1

申请日：2023-09-22

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 范桂枝 ,  姚大彬 ,  唐中华 ,  李德文 ,  由香玲 ,  詹亚光 ,  高兴蕾

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种同步促进刺五加胚性愈伤组织生长和黄酮累积的方法，属于生物技术领域。本发明提供了电刺激在同步促进刺五加胚性愈伤组织生长和黄酮累积中的应用，所述电刺激的电流强度为100mA，处理时间为30min。具体包括对刺五加胚性愈伤组织依次进行电刺激和暗培养，所述暗培养的培养时间为28d；所述胚性愈伤组织为经过继代培养2个周期的胚性愈伤组织。本发明协调了诱导或调控下活性物质累积和细胞生长不能同时兼顾的问题，为利用植物细胞工程技术生产活性物质提供了技术支撑。

公开(公告)号：CN113349053B

公开(公告)日：2022-03-22

申请号：CN202010142159.2

申请日：2020-03-04

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 由香玲 ,  赵越

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明提供了一种三七不定根快速增殖及生产三种主要人参皂苷的方法。首先将由三七子叶诱导来的不定根切成约1cm的小段，接种于含有不同浓度的IBA和NAA的1/2SH培养基和不含NH4NO3的1/2MS(1/2MS‑N)培养基。分析不定根的诱导及生长情况，确定了最佳培养方式是先将其接种于1/2SH+2.0mg/L IBA+2.0mg/L NAA培养基中，诱导新不定根形成，后转移至1/2MS‑N+2.0mg/L IBA培养基促进不定根伸长，并确定了50g/L的蔗糖为最适浓度。在此基础上，将在1/2SH+2.0mg/L IBA+2.0mg/L NAA培养基中培养3周的不定根接种于装有100mL 1/2MS‑N液体培养基中避光悬浮培养，分析不定根生长及三种人参皂苷(Rg1,Re,Rb1)累积，确定了最佳收获周期为7周；最佳蔗糖浓度为30g/L；最佳IBA浓度为4.0mg/L，最佳初始接种量为3.5g/100mL，此条件下，不定根中皂苷总累积量可达到11.13mg。

公开(公告)号：CN113115706B

公开(公告)日：2022-03-15

申请号：CN202010039492.0

申请日：2020-01-15

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 由香玲 ,  刘建飞

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明的目的是恢复和保持长白落叶松胚性愈伤组织的胚性—通过调节胚性愈伤组织继代培养基中激素浓度的方法。胚性愈伤组织在S+0.1mg·L‑12，4‑D+0.04mg·L‑1BA+0.02mg·L‑1KT激素条件下，继代6个月后发现胚性愈伤组织的体胚分化率急剧下降。经去除2，4‑D，逐渐降低NAA的方法恢复胚性：将胚性愈伤组织接种在每2周NAA浓度从0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg·L‑1依次降低的S培养基中进行胚性恢复培养，其中S培养基中激素还包含0.5mg·L‑1BA、0.5mg·L‑1KT。最终在S+0.2mg·L‑1NAA+0.5mg·L‑1BA+0.5mg·L‑1KT+0.5g·L‑1谷氨酰胺+0.5g·L‑1水解酪蛋白+30g·L‑1蔗糖+3g·L‑1植物凝胶培养条件下持续继代2年，胚性仍然保持良好。将胚性恢复的愈伤组织经分化培养后，体胚发生率可达100％。将发育正常的体细胞胚胎转入萌发培养基中，4周后成苗率可达46.2％。

公开(公告)号：CN104031970B

公开(公告)日：2017-01-25

申请号：CN201410260611.X

申请日：2014-06-12

Applicant: 东北林业大学 ,  詹亚光 ,  曾凡锁

Inventor： 詹亚光 ,  曾凡锁 ,  辛颖 ,  刘堃 ,  齐凤慧 ,  范桂枝 ,  尹静 ,  由香玲

IPC: C12P33/00

Abstract: 本发明属于生物工程领域，具利用体涉及一种SNP提高白桦细胞中白桦三萜和齐墩果酸含量的方法。以白桦花药悬浮细胞为实验材料，按50g/L接种量接种于100mL B5液体培养基中，培养条件为：120rpm，25℃，光照强度2000lx，光周期16h，湿度40％～50％，培养周期为10d。培养基成分为B5基本培养基，附加激素及浓度为0.2mg/L6-BA和0.6mg/L TDZ，蔗糖20g/L，酸水解酪蛋白1g/L，pH5.5～6.0，121℃高温高压灭菌20min。在细胞悬浮培养第8天加入SNP使其终浓度为1mmol/L，培养12h后收获，齐墩果酸含量最高为1.3089mg/gDW，是对照组的569％。培养48h收获，细胞内总三萜含量达到23.86mg/gDW，为对照组的143.20％。该申请发明为解决天然植物药物来源紧缺和工业化大规模生产白桦三萜和齐墩果酸药物提供了一种新途径。

公开(公告)号：CN102907318B

公开(公告)日：2015-09-09

申请号：CN201110217125.6

申请日：2011-08-01

Applicant: 东北林业大学 ,  由香玲

Inventor： 由香玲 ,  詹亚光 ,  李玉花 ,  谭啸 ,  代金玲 ,  陶雷 ,  尹静

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明主要提供一种高效无性快繁三七再生植物的方法利--用生物反应器大量培养三七体细胞胚。从不定根诱导获得的三七胚性愈伤组织增殖后，在含有0.5mg/L 2，4-D的MS条件下，100％的愈伤组织都产生了球形体细胞胚，且产生的体细胞胚数量最多。10.0g(约1.65×104个)球形胚培养在3L生物反应器内，反应器内装有1.5L不加任何植物生长调节剂的1/2MS液体培养基，空气通入量为0.15vvm。4周后球形胚都发育为子叶体细胞胚，且生物生长量增加约为原来的8倍。液体或固体培养获得的子叶体细胞胚在含加有2.0mg/LGA3的1/2MS培养基中萌发成正常体细胞胚苗，继而在不含任何植物生长调节剂的1/2MS培养基中继代。生长良好的幼苗移栽入装有人工土壤(泥煤苔和泥质岩(3∶1，v∶v))的营养杯中，温室训化成活率较高。

公开(公告)号：CN102898493B

公开(公告)日：2015-07-29

申请号：CN201110214567.5

申请日：2011-07-29

Applicant: 东北林业大学 ,  李玉花 ,  由香玲

Inventor： 李玉花 ,  由香玲 ,  刘宪红 ,  谭啸 ,  代金玲 ,  吴昊

IPC: C07J17/00 ,  A01H4/00

Abstract: 本发明提供了一种利用3～10L小型玻璃生物反应器培养人参不定根的方法。装有1.5L1/2SH+3.0mg/LIBA+20g/L蔗糖培养基的3L反应器内接种8g长度约1.0cm的人参不定根；5和10L生物反应器中分别装有3L和6L上述同样培养基，分别接种15g和30g同样的人参不定根；同样都培养7周进行收获，人参不定根中三种人参皂苷Rg1、Re、Rb1的累积最佳。本发明可为人参不定根的小规模和进一步扩大化培养提供技术支持和参数，也可以为大规模生产提供生产人参不定根种子的方法。

公开(公告)号：CN104031970A

公开(公告)日：2014-09-10

申请号：CN201410260611.X

申请日：2014-06-12

Applicant: 东北林业大学 ,  詹亚光 ,  曾凡锁

Inventor： 詹亚光 ,  曾凡锁 ,  辛颖 ,  刘堃 ,  齐凤慧 ,  范桂枝 ,  尹静 ,  由香玲

IPC: C12P33/00

Abstract: 本发明属于生物工程领域，具利用体涉及一种利用SNP提高白桦细胞中白桦三萜和齐墩果酸含量的方法。以白桦花药悬浮细胞为实验材料，按50g/L接种量接种于100mL B5液体培养基中，培养条件为：120rpm，25℃，光照强度2000lx，光周期16h，湿度40％～50％，培养周期为10d。培养基成分为B5基本培养基，附加激素及浓度为0.2mg/L6-BA和0.6mg/L TDZ，蔗糖20g/L，酸水解酪蛋白1g/L，pH5.5～6.0，121℃高温高压灭菌20min。在细胞悬浮培养第8天加入SNP使其终浓度为1mmol/L，培养12h后收获，齐墩果酸含量最高为1.3089mg/gDW，是对照组的569％。培养48h收获，细胞内总三萜含量达到23.86mg/gDW，为对照组的143.20％。该申请发明为解决天然植物药物来源紧缺和工业化大规模生产白桦三萜和齐墩果酸药物提供了一种新途径。

公开(公告)号：CN103436485A

公开(公告)日：2013-12-11

申请号：CN201310372816.2

申请日：2013-08-23

Applicant: 东北林业大学 ,  范桂枝 ,  詹亚光

Inventor： 范桂枝 ,  詹亚光 ,  李晓灿 ,  孙菲菲 ,  李春雪 ,  曾凡锁 ,  齐凤慧 ,  由香玲 ,  尹静

IPC: C12N5/04 ,  A01G1/04

Abstract: 本发明提供一氧化碳（CO）的一种用途，所述用途为CO提高了桑黄菌丝中白桦酯醇和筋骨草悬浮细胞中蜕皮激素的含量。将5～25μmol/L和8～20μmol/L的CO供体氯高铁血红素分别添加到桑黄菌丝和筋骨草悬浮培养体系中，处理4d后收获处理材料，采用高效液相色谱分析白桦酯醇和蜕皮激素含量发现，10μmol/L氯高铁血红素处理桑黄菌丝4d时，白桦酯醇含量和产量分别比对照增加了6.10倍和6.48倍；12μmol/L氯高铁血红素处理筋骨草悬浮细胞4d时，蜕皮激素含量是对照组的1.50倍。同时发现氯高铁血红素促进了桑黄菌丝的生长，15μmol/L处理下的菌丝干重值比对照增加了10.62%。可见，该发明为促进次生代谢物的合成提供了一种新的诱导子。