公开(公告)号：CN112335609B

公开(公告)日：2022-07-29

申请号：CN202011069964.3

申请日：2020-09-30

Applicant: 生态环境部南京环境科学研究所

Inventor： 方志翔 ,  刘标 ,  沈文静 ,  张莉 ,  刘来盘 ,  刘国强

IPC: A01K67/033 ,  A23K50/90 ,  A23K20/147 ,  A23K10/37

Abstract: 本发明公开评价转基因外源蛋白对蛴螬影响的生物检测方法，配制转基因外源蛋白稀释液；将玉米芯粉碎研磨，高温高压灭菌得到玉米芯粉末；将玉米芯粉末加入到蛋白稀释液中，在离心管中充分震荡混匀，静置，离心，取出上清液；将上清液重新加入离心管，重复多次；最后离心得到的沉淀即为吸附好蛋白的玉米芯粉；取蛴螬置于底部铺满土壤的小烧杯中，饲喂吸附好蛋白的玉米芯粉、空白玉米芯粉以及辛硫磷乳油浸泡后的玉米芯粉组，置于培养箱中饲养，观察蛴螬存活情况与体重变化情况评价转基因外源蛋白对蛴螬的影响。本发明对尚未应用于作物的多种新型转基因外源蛋白均能够有效检测其对蛴螬的影响，具有很强的实用性。

公开(公告)号：CN112655655B

公开(公告)日：2022-05-10

申请号：CN202011536129.6

申请日：2020-12-23

Applicant: 生态环境部南京环境科学研究所

Inventor： 沈文静 ,  刘标 ,  方志翔 ,  张莉 ,  刘来盘

IPC: A01K67/033 ,  A23K10/30 ,  A23K10/37 ,  A23K50/90 ,  C04B30/00

Abstract: 本发明公开了一种评价转基因植物秸秆对蚯蚓蚓茧孵化和新生蚯蚓发育影响的方法，该方法是将经预处理转基因植物秸秆混合土壤添加到透明培养皿中，将蚓茧放入，可实时观察蚓茧孵化情况，确定新生蚯蚓日龄。在此基础上可获得蚓茧孵化率、每茧孵化新生蚯蚓数量、体重和体内酶学准确数据，避免现有方法只能够获得最终新生蚯蚓数量而无蚓茧孵化率、幼蚓存活率和生长发育数据的缺陷。

公开(公告)号：CN118460685A

公开(公告)日：2024-08-09

申请号：CN202410684914.8

申请日：2024-05-30

Applicant: 生态环境部南京环境科学研究所

Inventor： 刘来盘 ,  刘标 ,  方志翔 ,  沈文静 ,  张莉

IPC: C12Q1/6858 ,  C12Q1/6895

Abstract: 本发明公开了一种转基因玉米向非转基因玉米基因漂移频率的监测方法，涉及转基因生态安全监测技术领域，包括以下步骤：步骤S1、针对相邻种植的转基因玉米和非转基因玉米，待生长成熟后，采集非转基因玉米的种子作为待检样品；步骤S2、设计KASP检测引物和内源基因的检测引物；步骤S3、基于KASP检测引物和内源基因的检测引物，利用KASP技术对待检样品中提取的DNA进行基因分型检测，根据基因分型检测的结果确定转基因玉米向非转基因玉米的基因漂移频率。本发明针对现有转基因玉米基因漂移频率检测方法的不足，设计了可监测不同转基因玉米基因漂移频率的实验方法，完善了转基因玉米基因漂移风险监测体系。

公开(公告)号：CN114431179A

公开(公告)日：2022-05-06

申请号：CN202210180855.1

申请日：2022-02-25

Applicant: 生态环境部南京环境科学研究所

Inventor： 张莉 ,  刘标 ,  李莉 ,  刘胜男 ,  方志翔 ,  沈文静 ,  刘来盘

IPC: A01K61/59 ,  C07K14/32

Abstract: 本发明揭示了一种Bt杀虫蛋白对大型蚤安全性影响的评价方法，其包括以下步骤：S1)获取大型蚤；S2)配制受试杀虫蛋白溶剂溶液为阴性对照组、重铬酸钾溶液为阳性对照组、受试杀虫蛋白溶液为处理组；S3)配置大型蚤培养液；S4)将大型蚤单只置于器皿中，每器皿添加50mL大型蚤培养液，制备上述三个试验组，每个试验组不少于30个大型蚤；测试过程中，每日添加斜生栅藻饵料，每天观察、记录试验蚤死亡头数、新生幼蚤数并将其移出；试验持续时间为21d，通过对比处理组和对照组大型蚤存活率、产新生幼蚤数指标来评价Bt杀虫蛋白对大型蚤的影响。本发明能够更高效、更准确的体现Bt蛋白对水生生物大型蚤的安全性。

公开(公告)号：CN109937971A

公开(公告)日：2019-06-28

申请号：CN201910210319.X

申请日：2019-03-19

Applicant: 生态环境部南京环境科学研究所

Inventor： 方志翔 ,  刘标 ,  张莉 ,  沈文静 ,  刘来盘

IPC: A01K67/033 ,  A23K50/90 ,  A23K10/30 ,  A23K10/20 ,  A23K10/16 ,  A23K20/174 ,  A23K20/147 ,  A23K20/105 ,  A23K20/158 ,  A23K20/163

Abstract: 本发明公开了一种人工饲养蠼螋的方法，以及该方法在转基因植物环境影响评价中的应用。本发明以创新性的人工饲料和人工土壤饲养革翅目昆虫蠼螋，并根据各品种蠼螋的食性不同建立两套喂饲方法：（1）人工饲料直接喂饲植食性或杂食性蠼螋；（2）低龄棉铃虫或黄粉虫幼虫喂饲捕食性或杂食性蠼螋。使用该方法饲养的蠼螋可以正常生长，发育，繁殖。且与其它昆虫饲养方法相比，该方法蠼螋取食率高，生长活跃，繁殖力强。之后我们将该方法应用于转基因植物的安全性评价研究，使用转基因植物组织添加进人工饲料喂饲蠼螋，以蠼螋的体重、体长和存活率作为指标，比较转基因组与亲本组的差异，通过方差分析比较其差异显著性，评价了转基因作物对蠼螋的影响。