公开(公告)号：CN106947780A

公开(公告)日：2017-07-14

申请号：CN201710191095.3

申请日：2017-03-28

Applicant: 扬州大学

Inventor： 成勇 ,  张婷

IPC: C12N15/90 ,  C12N9/22 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/907 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/107 ,  C12N9/22 ,  C12N15/102

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种兔MSTN基因编辑方法。该方法是利用CRISPR/Cas9在兔MSTN基因座定点实现基因修饰；包括根据兔MSTN基因靶序列位点设计和引导序列、利用引导序列构建2种CRISPR/Cas9二合一质粒mstn‑sgRNA1和mstn‑sgRNA2、体外转录出sgRNA‑1、sgRNA‑2和Cas9mRNA并形成两种二合一复合物的分子生物学材料，再利用该分子生物学材料制备转基因兔，诱导MSTN基因编码序列第3外显子4881‑4903及4796‑4818位核苷酸序列的突变与缺失的步骤。应用本发明方法可实现MSTN基因突变和基因敲除，获得MSTN表达缺失或降低的基因编辑兔，本发明可用于瘦肉型兔基因编辑育种。