一种香紫苏内生真菌转化三七皂苷生成人参皂苷的方法

    公开(公告)号:CN117025710A

    公开(公告)日:2023-11-10

    申请号:CN202310711616.9

    申请日:2023-06-15

    Abstract: 本发明提供了一种香紫苏内生真菌转化三七皂苷生成人参皂苷的方法,其是将该香紫苏内生真菌接种至含有三七皂苷的PDB液体培养基中,发酵生产人参皂苷。其中所述的香紫苏内生真菌为散囊菌纲曲霉属,分类命名为Aspergillus tubingensis XY17,于2022年11月07日在中国典型培养物保藏中心登记保藏,保藏号为CCTCC No:M20221729。本发明方法克服了过去使用不属于食品药品安全生产的细菌及霉菌作为发酵菌种而不能用于食品及药品生产的缺点,同时克服了传统物理方法及化学方法反应步骤繁多、副产物较难去除及环境污染等缺点,可实现规模化生产,具有较高应用价值。

    一种原人参二醇酵母细胞工厂的构建方法及其应用

    公开(公告)号:CN115340957B

    公开(公告)日:2023-09-29

    申请号:CN202211048608.2

    申请日:2022-08-29

    Inventor: 李检秀 谢能中

    Abstract: 本发明公开一种原人参二醇酵母细胞工厂的构建方法及其应用,以酿酒酵母BY4742为出发菌株,通过同源重组的方式,将不同物种来源的3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶、法尼基焦磷酸合成酶、角鲨烯合酶、角鲨烯环氧酶、达玛烯二醇合酶、原人参二醇合酶以及提供还原力NADPH的辅酶,整合到BY4742染色体多拷贝位点区,构建得到原人参二醇底盘细胞,然后经过多途径代谢网络优化,促进内质网膜扩增,削弱竞争性代谢途径法尼醇和羊毛甾醇的代谢流。基于上述组合策略构建得到的PPD细胞工厂,摇瓶批次发酵产量达到563.60±1.65mg/L,以葡萄糖、木薯淀粉水解液、甘蔗汁、甘蔗糖蜜为碳源进行5L发酵罐补料发酵,PPD产量最高为23.92±0.96 g/L。

    利用豆粕粉同步酶解发酵制备(R,R)-2,3-丁二醇的方法

    公开(公告)号:CN104894170A

    公开(公告)日:2015-09-09

    申请号:CN201410080322.1

    申请日:2014-03-06

    CPC classification number: C12P7/18

    Abstract: 一种利用豆粕粉同步酶解发酵制备(R,R)-2,3-丁二醇的方法,包括如下步骤:将类芽孢杆菌(Paenibacillus?sp.)接种到以豆粕粉作为有机氮源的发酵培养基中进行发酵培养,所得发酵液中即含有(R,R)-2,3-丁二醇;所述豆粕粉在所述发酵培养基中的终浓度为10-80g/L;所述类芽孢杆菌(Paenibacillus?sp.)为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus?polymyxa)。在分批补料发酵中,发酵液中(R,R)-2,3-丁二醇的浓度达到92.5g/L,光学纯度达到98%。采用本发明能够减少了酵母粉用量,且酶解与发酵同步进行,简化了操作步骤,降低了高纯度(R,R)-2,3-丁二醇生产成本。

    一组糖基转移酶基因及其在制备三七/人参皂苷中的应用

    公开(公告)号:CN115109787A

    公开(公告)日:2022-09-27

    申请号:CN202110285350.7

    申请日:2021-03-17

    Abstract: 本发明公开一组糖基转移酶基因及其在制备三七/人参皂苷中的应用,所述的基因为首次在三七基因组中挖掘得到3个糖基转移酶新基因,分别命名为PnUGT 87、PnUGT 19、PnUGT12,具有如SEQ ID NOs:1、2或3所示的核苷酸序列;同时公开了所述的糖基转移酶基因编码的氨基酸序列,分别如SEQ ID NOs:4、5或6所示。同时本发明还公开了含有上述基因的表达载体,以及由所述表达载体转化的宿主细胞。本发明的糖基转移酶基因弥补了现有人参/三七皂苷生物合成相关的基因的数量较少,绝大部分人参/三七皂苷分子合成机制尚不明确,为人工合成人参/三七皂苷单体提供新基因。

    光学纯meso‑2,3‑丁二醇高产工程菌株的构建方法及应用

    公开(公告)号:CN107201374A

    公开(公告)日:2017-09-26

    申请号:CN201710509034.7

    申请日:2017-06-28

    Abstract: 本发明公开了一种光学纯meso‑2,3‑丁二醇高产工程菌株的构建,该构建方法是将α‑乙酰乳酸合成酶基因、α‑乙酰乳酸脱羧酶基因和meso‑2,3‑丁二醇脱氢酶基因的核苷酸序列进行密码子优化,然后拼接获得包含该三个基因的基因簇,再将基因簇导入表达载体中获得多顺反子重组质粒,最后将重组质粒再导入宿主菌E.coli即得所述高产工程菌,该菌所用的合成原料来源广泛、成本低,菌株无致病性,菌株产量高、生产效率高、稳定性好,最高产量可达到91.5 g/L,光学纯度可达99%以上。本发明同时公开了上述高产工程菌株利用廉价木薯粉为碳源,利用棉籽蛋白粉、豆粕粉、豆饼粉或花生蛋白粉为氮源在生产光学纯meso‑2,3‑丁二醇中的应用,降低了生产成本。

    一种光学纯R-乙偶姻的生产方法

    公开(公告)号:CN104087602B

    公开(公告)日:2017-01-04

    申请号:CN201410341765.1

    申请日:2014-07-17

    Abstract: 一种光学纯R-乙偶姻的生产方法,包括如下步骤:将(R,R)-2,3-丁二醇脱氢酶基因(bdh)和葡萄糖脱氢酶基因(gdh)在大肠杆菌中共表达,并以此重组大肠杆菌休止细胞为生物催化剂,以丁二酮为前体转化生产光学纯R-乙偶姻。葡萄糖脱氢酶能够提供(R,R)-2,3-丁二醇脱氢酶所需的辅酶NADH,而(R,R)-2,3-丁二醇脱氢酶在NADH存在的条件下具有催化丁二酮生成光学纯R-乙偶姻的特性,R-乙偶姻的产量可达26g/L,光学纯度为99.6%。本发明的方法培养基简单,操作过程简便,产物分离方便,不需要复杂的手性拆分步骤,并且实现胞内辅酶的再生,成本低,极具工业应用前景。

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