公开(公告)号：CN1869704A

公开(公告)日：2006-11-29

申请号：CN200610091481.7

申请日：2006-06-14

Applicant: 厦门大学

Inventor： 彭宣宪 ,  庄振宏 ,  王三英

IPC: G01N33/68 ,  C12Q1/04

Abstract: 快速鉴定与病原菌互作的宿主蛋白的方法，涉及一种运用革兰氏阳性和阴性灭活病原菌快速分离纯化与之互作的宿主蛋白的方法。提供一种快速可靠检测鉴定与病原菌互作的宿主蛋白的方法。利用甲醛灭活病原菌；用洗脱液去除病原菌菌体外膜上易脱落成分；让病原菌与宿主蛋白孵育，让宿主蛋白中能与病原菌互作的蛋白黏附到病原菌表面；用洗脱液收集互作的宿主蛋白。由于利用灭活病原菌捕捉宿主体内相互作用蛋白，采用灭活的病原菌吸附宿主蛋白，避免因活菌而使互作的宿主蛋白受到病原菌外膜或者分泌蛋白污染的问题。所得蛋白全来源于宿主，无病原菌污染物，是一种高效可靠的检测宿主中参与针对病原菌的防御系统中的首道防线中的蛋白组成情况的方法。

公开(公告)号：CN1821749A

公开(公告)日：2006-08-23

申请号：CN200610070803.X

申请日：2006-03-10

Applicant: 厦门大学

Inventor： 彭宣宪 ,  肖昆 ,  王三英

IPC: G01N21/17 ,  G01N33/48 ,  C12Q1/02

Abstract: 活菌微量检测方法，涉及一种病原性活菌，提供一种微量快速检测病原性活菌的方法。步骤为免疫捕捉，将针对病原菌的特异性抗体包被至已经预加碳酸缓冲液的固相载体各孔中静置或孵育，用含有非离子型去污剂的磷酸盐－吐温缓冲液洗板；加入小牛血清封闭甩干；加入细菌溶液，温育得病原菌；捕捉到病原菌后，在固相载体的各孔中加入培养基，培养后离心，丢弃上清，加入无菌双蒸水混匀作为PCR反应模板；取无菌的新枪头分别吸加10×PCR缓冲液，dNTP，MgCl2溶液，两条引物，Taq酶及PCR反应模板于PCR管中心至管底；扩增后取PCR产物电泳上样缓冲液混合，点样于琼脂糖凝胶中电泳，观察结果。快速简便，高效灵敏。

公开(公告)号：CN1699596A

公开(公告)日：2005-11-23

申请号：CN200410045432.0

申请日：2004-05-19

Applicant: 厦门大学

Inventor： 彭宣宪 ,  纪念念 ,  彭博 ,  王三英

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04

Abstract: 细菌微量快速同步检测方法，涉及一种微量快速同步检测细菌的方法。步骤为制备模板；PCR扩增：扩增引物为细菌核糖体核糖核酸基因通用引物；变性梯度凝胶电泳：取扩增产物进行变性梯度凝胶电泳，确定种类。采用UPPCR技术扩增细菌的16S rRNA基因片段，获得培养基中所有细菌相应基因片段序列的信息，再采用DGGE鉴定混合细菌的扩增产物，以确定检测的细菌。建立采用UPPCR和DGGE相结合的微量快速同步鉴定混合细菌的检测方法。达到微量、快速、同步检测混合细菌尤其是病原菌的目的。

公开(公告)号：CN1176218C

公开(公告)日：2004-11-17

申请号：CN02101983.5

申请日：2002-01-22

Applicant: 厦门大学

Inventor： 彭宣宪 ,  王三英 ,  张建营

IPC: C12Q1/68 ,  G01N33/569

Abstract: 涉及一种检测细菌的免疫捕捉法通用引物PCR方法，采用针对各种细菌的特异性抗体进行包被，经封闭后加入细菌溶液于36～38℃下免疫捕捉，然后热变性释放模板，吸取裂解液作为PCR反应模板，最后利用细菌16S rRNA基因通用引物进行PCR，本发明将抗原抗体反应的特异性与PCR强大的扩增效率相结合，建立了检测病原菌的iUPPCR，其特异性是通过抗体对抗原的特异识别来达到，只有能被抗体识别的细菌才能被捕捉到，而被捕捉到的细菌均可经通用引物按同一程序扩增，故可以达到快速检出的目的，重复性好，特异性强、敏感性高，其原理可用于几乎所有病原菌的检测，具有较好的应用推广价值。