公开(公告)号：CN111500769A

公开(公告)日：2020-08-07

申请号：CN202010224409.7

申请日：2020-03-26

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘斐 ,  李嘉豪 ,  单衍可 ,  李悦 ,  张越

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  G01N33/543 ,  G01N33/58 ,  G01N33/533

Abstract: 本发明公开了一种检测SARS-CoV-2核酸的荧光免疫层析方法，包括以下几个步骤：步骤一，结合重组酶介导等温核酸扩增技术，取适量待测样品进行核酸扩增；步骤二，结合CRISPR/Cas13a基因编辑工具，在扩增产物里加入LwaCas13a蛋白进行反应；步骤三，将反应产物与量子点微球标记抗FITC抗体溶液混合后加在核酸试纸条上，使用荧光分析仪读取结果或紫外激光灯进行结果观察。本发明采用RAA技术与核酸试纸条检测技术相结合的方法，相比于传统的RT-PCR检测手段，能够利用简单的实验仪器更快速高效的对SARS-CoV-2进行检测。

公开(公告)号：CN111426844A

公开(公告)日：2020-07-17

申请号：CN202010177860.8

申请日：2020-03-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘斐 ,  王彬 ,  单衍可 ,  刘婧 ,  李嘉豪

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/58 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/558

Abstract: 本发明公开一种新型冠状病毒SARS-CoV-2 IgG-IgM抗体联检的荧光免疫层析试纸条，该试纸条包括底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次首尾衔接粘贴在底板上，结合垫上包被有SARS-CoV-2结构蛋白-标记物和羊抗兔IgG-标记物，硝酸纤维素膜上设有包被鼠抗人IgG单克隆抗体的检测线T1、包被鼠抗人IgM单克隆抗体的检测线T2和包被兔IgG的质控线C。利用该试纸条定量检测SARS-CoV-2 IgG和IgM抗体，检测灵敏度高，特异性好，可达96％；批次批间差异小，具有良好的重复性；常温可保存半年且灵敏度不降低，具有良好的稳定性；操作简单，成本低廉，可快速定量检测人体内SARS-CoV-2 IgG和IgM抗体水平，辅助核酸检测手段，为疫情提供有力支持。

公开(公告)号：CN111206030A

公开(公告)日：2020-05-29

申请号：CN202010098589.9

申请日：2020-02-18

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘斐 ,  李嘉豪 ,  单衍可 ,  李悦

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种基于玻纤滤纸的病毒核酸提取方法，包括以下几个步骤：步骤一，在生物样本中加入蛋白酶K，快速混匀，得混合溶液；步骤二，加入结合缓冲液和Carrier RNA，上下颠倒充分混匀；步骤三，将混合液滴加在玻纤滤纸上，玻纤滤纸以双圈滤纸为支撑物固定，过滤的废液用吸水纸吸去；步骤四，用洗涤缓冲液清洗，再用吸水纸吸去废液；步骤五，在玻纤滤纸上滴加洗脱缓冲液，收集洗脱液即获得所需核酸。本方法将玻纤滤纸引入核酸抽提方法中，可以用于生物样本中核酸的富集和提取。该方法简化了核酸抽提的步骤和所需仪器设备，节省了操作时间，降低了提取成本，同时保证了高效的核酸回收率。

公开(公告)号：CN108396059A

公开(公告)日：2018-08-14

申请号：CN201810166722.2

申请日：2018-02-28

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘斐 ,  吴旭平 ,  李嘉豪

IPC: C12Q1/6816 ,  C12Q1/70

Abstract: 本发明涉及乙肝病毒检测技术领域，特别涉及一种检测乙肝病毒的试剂盒及其检测方法。本发明的试剂盒包括：脂质体-QD复合物标记的报告探针，磁珠修饰的捕获探针和缓冲液；所述报告探针核酸序列和所述捕获探针核酸序列分别与乙肝病毒DNA互补。本发明用脂质体包裹量子点，使荧光信号更加放大和集中，有利于检测灵敏度。本发明的试剂盒检测灵敏度高、特异性好，检测极限为10fmol，1个小时即可得到检测结果。

公开(公告)号：CN116656621A

公开(公告)日：2023-08-29

申请号：CN202310462267.1

申请日：2023-04-26

Applicant: 江苏省农业科学院 ,  南京农业大学

Inventor： 韦艳娜 ,  刘蓓蓓 ,  冯志新 ,  谢青云 ,  白昀 ,  刘斐 ,  李嘉豪 ,  陈蓉 ,  郝飞 ,  谢星 ,  邵国青

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/08 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  G01N33/58 ,  G01N33/543 ,  G01N33/533

Abstract: 本发明提供分泌抗非洲猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于生物技术领域。分泌抗非洲猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1F9，保藏编号为CCTCC NO：C2019271。本发明还提供所述杂交瘤细胞株分泌的抗非洲猪瘟病毒单克隆抗体及其在检测非洲猪瘟病毒的蛋白免疫印迹中的应用、在制备检测非洲猪瘟病毒的量子点荧光试纸条方面的应用。采用该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体能够高特异性高灵敏度地检测非洲猪瘟病毒。

公开(公告)号：CN111381038A

公开(公告)日：2020-07-07

申请号：CN202010149867.9

申请日：2020-03-06

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘斐 ,  王欣 ,  李嘉豪 ,  张越 ,  王绶玙

IPC: G01N33/58 ,  G01N33/535 ,  G01N33/52

Abstract: 本发明属于小分子物质检测领域，具体涉及一种基于纸芯片比色的同时快速定量检测四环素和氯霉素的方法；本发明首先通过喷蜡打印技术和生物修饰制备纸芯片，然后基于竞争酶联免疫吸附原理，样品中的四环素或者氯霉素与固定在纸芯片上的对应抗原竞争结合相对应的特异性单抗，又与辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗结合，最终固定在纸芯片上的辣根过氧化物酶与加入的TMB/H2O2显色底物溶液发生反应产生颜色变化，并且显色深浅与抗生素的含量成反比，整个检测过程不超过10 min，单个检测的成本不超过1 RMB。相比较传统检测抗生素的方法，本发明解决了前处理复杂、操作成本高、耗时长、需要专业仪器的问题，实现了对四环素和氯霉素的现场快速同时定量检测。