公开(公告)号：CN118325956A

公开(公告)日：2024-07-12

申请号：CN202410622831.6

申请日：2024-05-20

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 孙晶晶 ,  王长泉 ,  黄煜雯 ,  袁国振 ,  刘金义 ,  陆俊 ,  刘虹池

IPC: C12N15/82 ,  A01H5/06 ,  A01H6/74

Abstract: 一种利用发根农杆菌介导月季叶片产生转基因根系及基因定位鉴定的方法，包括以下步骤：构建目标基因的过表达载体，反应产物转化大肠杆菌后，采用LB固体培养基筛选阳性克隆，菌落PCR鉴定后摇菌提取质粒，得到含有目的基因的过表达重组质粒；将含有目的基因的过表达重组质粒转化发根农杆菌，在YEB固体培养基上筛选阳性克隆，在YEB固体培养基上进行划线培养得到发根农杆菌菌块；或摇菌到对数增长期，OD600＝0.6～0.8，即所得菌液离心后沉淀用，用1/2MS重新悬浮，调整OD600＝0.8，得到供侵染的发根农杆菌重悬菌液；采用发根农杆菌菌块或重悬菌液侵染月季叶片；培养后利用手持紫外灯进行阳性根系筛选，利用激光共聚焦鉴定目标基因位置。

公开(公告)号：CN107014792A

公开(公告)日：2017-08-04

申请号：CN201710259815.5

申请日：2017-04-20

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王长泉 ,  刘金义 ,  陆俊 ,  任浩然 ,  白梦娟

IPC: G01N21/64 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00

CPC classification number: G01N21/6428 ,  C12N15/8212

Abstract: 本发明公开了一种利用月季瞬时表达系统鉴定蛋白互作的方法，包括如下步骤：（1）提取含有目的基因的入门载体质粒；（2）将含有目的基因的入门载体质粒分别和含有萤火虫荧光素酶基因N端、C端的双元表达载体进行LR重组反应，提取质粒；（3）将LR反应后得到的含有目的基因和萤火虫荧光素酶基因片段的重组质粒转化农杆菌，制备转化液；（4）取继代培养1个月的月季无菌苗转移到上述所得转化液中，真空渗透3～5分钟，然后用无菌水清洗后将月季苗放回到继代培养基中培养；（5）取上述转化后月季苗均匀喷洒荧光素后放置CCD荧光照相系统的暗室中拍照，鉴定是否存在蛋白互作。本发明简便易行、设备要求不高、假阳性率低。

公开(公告)号：CN116868893B

公开(公告)日：2024-11-01

申请号：CN202310939869.1

申请日：2023-07-28

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘金义 ,  范春国 ,  王长泉 ,  陆俊 ,  孙晶晶 ,  陈茂媛

IPC: A01H4/00 ,  A01G31/00 ,  A01G24/28 ,  A01G24/15

Abstract: 本发明公开了一种单叶蔷薇异位繁殖保存的方法及其应用，所述单叶蔷薇异位繁殖保存方法具体包括以下步骤：采集成熟的单叶蔷薇果实，剥取其中的种子，晾干，消化，浸泡，消毒，冲洗后备用；得到的单叶蔷薇种子接种在初代培养基上，待种子萌发形成小苗后切分成茎段，接种到增殖培养繁殖，再接种到壮苗培养基上培养，后进行生根培养，生根后的单叶蔷薇组培苗经练苗移栽即可实现单叶蔷薇的异位繁殖保存。本发明的异位繁殖保存的方法可以实现单叶蔷薇的异地保存，打破了由于单叶蔷薇繁殖方式的限制，一直无法在新疆之外的地区保存的问题，同时大幅度提高了单叶蔷薇组培苗移栽成活率，与种植实生苗相比，组培苗生长更加旺盛、分枝更多。

公开(公告)号：CN118235627A

公开(公告)日：2024-06-25

申请号：CN202410454525.6

申请日：2024-04-16

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 陆俊 ,  王长泉 ,  刘金义 ,  孙晶晶 ,  朱万俊 ,  范春国 ,  袁国振 ,  郭雨含

IPC: A01G2/10

Abstract: 本发明公开了一种提高夏季月季扦插生根能力的方法，包括：选择当年生、半木质化、无明显病虫害的月季枝条作为扦插母枝，截成插穗；插穗杀菌处理；苗床准备：将基质铺满育苗盘形成扦插苗床，在扦插前用水将基质浸透；插穗处理：插穗进行扦插，扦插深度约为插穗长度的2/3，保证插穗顶芽在扦插苗床以上1～2cm；扦插管理：扦插后浇透水；扦插当日对插穗喷施亚精胺工作液及α‑酮戊二酸工作液，之后每2天1次喷施亚精胺工作液及α‑酮戊二酸工作液，喷施至插穗生根；扦插育苗期间，采用全光雾喷施，保持育苗盘内基质湿润，但育苗盘不能积水。本发明方法显著提高了月季插穗在夏季高温条件下的生根能力，能够显著促进不定根再生和幼苗的长势。

公开(公告)号：CN114097349A

公开(公告)日：2022-03-01

申请号：CN202111633761.7

申请日：2021-12-29

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王长泉 ,  曹溆 ,  陆俊 ,  刘金义 ,  孙晶晶

IPC: A01C1/00

Abstract: 本发明属于植物育种技术领域，本发明提供了一种利用EMS对无刺野蔷薇进行育种的方法。本发明通过合理的种子层积时间、EMS处理浓度和时间获得了黄叶无刺蔷薇。本发明方法简便、易于操作、处理效果明显，获得的黄叶无刺蔷薇性状稳定可靠。

公开(公告)号：CN108611353B

公开(公告)日：2021-07-06

申请号：CN201810437844.0

申请日：2018-05-09

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王长泉 ,  刘金义 ,  陆俊 ,  孙晶晶

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/82 ,  C07K14/415 ,  A01H5/00 ,  A01H6/74

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，涉及一种用病毒诱导的基因沉默体系鉴定月季开花基因功能的方法。构建了烟草脆裂病毒TRV介导的RcCO基因病毒诱导基因沉默载体，并转化感受态农杆菌，继而通过真空渗透法对月季进行了瞬时转化，诱导了月季内源RcCO基因的沉默，实现病毒诱导的基因沉默体系鉴定月季开花基因功能。该种方法简便易行、材料易得，采用TRV 1/TRV 2‑RcCO等比例混合的侵染液侵染月季，假阳性率低，表型鉴定周期短、转化效率高，便于高通量操作，为大规模开展月季基因功能研究提供依据。