一种鲟鱼CRISPR/Cas9基因编辑方法

    公开(公告)号:CN107974466A

    公开(公告)日:2018-05-01

    申请号:CN201711282089.5

    申请日:2017-12-07

    Abstract: 本发明提供了一种鲟鱼CRISPR/Cas9基因编辑方法,是将Cas9蛋白与靶基因gRNA混合后,利用显微注射的方式,注射到受精时间不超过20分钟的鲟鱼1细胞期受精卵的动物极的受精孔中。将100 ng/µL Cas9 nuclease蛋白与30 ng/µL gRNA混合,采用显微注射方法,将混合物导入小体鲟1细胞期受精胚的动物极,孵化后可获得靶基因突变率高达83.1%的小体鲟胚胎,从而建立小体鲟靶基因精准编辑技术。靶基因发生突变的小体鲟胚胎可通过PAGE方法筛选获得。该技术既可以用于研究鲟鱼基因的功能,又可以用于精准修饰鲟鱼内源靶基因,培育遗传改良的鲟鱼养殖新品系。

    一种鱼类持续激活生长激素受体基因及制备方法和用途

    公开(公告)号:CN102241763A

    公开(公告)日:2011-11-16

    申请号:CN201110141084.7

    申请日:2011-05-27

    Abstract: 本发明公开了一种鱼类持续激活生长激素受体基因及制备方法和用途。通过对鲤鱼GHR信号肽、c-Jun亮氨酸拉链区以及GHR跨膜区和胞内区分别采取PCR扩增,结合又一轮的搭桥PCR扩增,获得持续激活的GHR重组基因片段;将获得的重组基因克隆入表达载体pCA-AT,获得用于基因转移的重组基因载体pCA-SJG-AT。一种编码的蛋白质,其序列为SEQIDNO:1所示的氨基酸序列,一种分离的重组基因,其序列为SEQIDNO:2所示的核苷酸序列。该重组基因在快速生长转基因鱼中的应用,具有如下优点:(1)重组GHR蛋白的促进信号通路活性高,持续激活的GHR作用比GH作用的效率高3倍以上;(2)持续激活的GHR基因的转基因促生长效应显著,转基因鱼比对照鱼生长速度快50%以上。

    一种壳聚糖甲基睾酮缓释药条的制备方法

    公开(公告)号:CN1306939C

    公开(公告)日:2007-03-28

    申请号:CN200510018148.9

    申请日:2005-01-13

    Abstract: 本发明公开了一种壳聚糖甲基睾酮缓释药条的制备方法,其步骤是:A.将壳聚糖配成水溶液,过滤;B.将壳聚糖溶液与甲基睾酮按一定比例混匀;C.用注射器推入NaOH凝固液中,放置一定时间后,取出;D.连续用蒸馏水漂洗,烘烤,即成壳聚糖甲基睾酮药条。该方法制备的药条能促进鱼类性腺发育,效果稳定,作用时间长,能应用于有效恢复因促性腺激素分泌不足导致不育或者是性腺发育延滞鱼类的育性,同时可用于鱼类性成熟催产。

    一种鱼类皮肤粘液腺生物反应器的制备方法及其应用

    公开(公告)号:CN110628818B

    公开(公告)日:2023-04-11

    申请号:CN201910912452.X

    申请日:2019-09-25

    Abstract: 本发明属于动物生物反应器制备技术领域,尤其涉及一种鱼类皮肤粘液腺生物反应器的制备方法及其应用。包括:鉴定鱼类皮肤粘液腺细胞特异表达基因、启动子和分泌蛋白信号肽,构建可在鱼类皮肤和粘液腺细胞中特异表达内源或异源生物活性物质的转基因表达载体,研制能够稳定遗传和将生物活性物质分泌到鱼类粘液中的转基因鱼类,将粘液腺分泌的生物活性物质用于动植物生长、抗逆和抗病,人类的健康保健与疾病防治,以及商业用酶类。本发明研制的鱼类皮肤粘液腺生物反应器具有繁育扩群容易、皮肤粘液分泌多、粘液收集方便、生物活性物质容易纯化等特点,可实现鱼类皮肤粘液腺生物反应器的规模化生产和高效应用。

    一种用于原始生殖细胞靶向突变的转基因载体及制备方法和用途

    公开(公告)号:CN105274141B

    公开(公告)日:2019-04-02

    申请号:CN201510809203.X

    申请日:2015-11-20

    Abstract: 本发明公开了一种用于原始生殖细胞靶向突变的转基因载体及制备方法和用途。将本发明提供的载体pTol2(UAS:Cas9)导入单细胞期斑马鱼胚胎,获得的Tg(UAS:Cas9)品系与Tg(kop:KalTA4品系)雌鱼杂交后,获得的杂交胚胎能够在斑马鱼原始生殖细胞中高效、特异、持续表达Cas9基因。在制备突变品系时,以Tg(UAS:Cas9)雄鱼与Tg(kop:KalTA4)雌鱼杂交胚胎作为受体胚胎,直接注射靶向基因的gRNA后,能够有效减少体细胞突变,从而增加注射的P0代胚胎的成活率,同时P0代成鱼能够有效的传递突变,具有广泛应用前景。

    一种超雄鲤鱼和遗传雄性而生理雌性鲤鱼的制备方法

    公开(公告)号:CN107079844B

    公开(公告)日:2018-02-13

    申请号:CN201710315756.9

    申请日:2017-05-08

    CPC classification number: Y02A40/812

    Abstract: 本发明涉及水产动物遗传育种技术领域,公开了一种超雄鲤鱼和遗传雄性而生理雌性鲤鱼的制备方法,采用该方法可以培育出YY型染色体的超雄鲤鱼,本发明获得了雄核发育的超雄YY鲤鱼,并通过微卫星标记亲子鉴定和测交试验确证。YY鲤鱼与普通雌性鲤鱼杂交产生的后代全部为雄性的鲤鱼,不需要进行鲤鱼性别鉴定,直接对这些已知性别的雄性幼鲤进行人工性反转,获得了遗传雄性而生理雌性的鲤鱼。本发明提供的方法培育出的YY超雄鲤鱼可以应用于控制作为外来种的鲤鱼种群,也可应用于鲤鱼的性别决定与分化等基础研究。遗传雄性而生理雌性鲤鱼的制备技术为进一步研制YY型雌性鲤鱼提供借鉴。

    一种超雄鲤鱼和遗传雄性而生理雌性鲤鱼的制备方法

    公开(公告)号:CN107079844A

    公开(公告)日:2017-08-22

    申请号:CN201710315756.9

    申请日:2017-05-08

    CPC classification number: Y02A40/812 A01K61/00

    Abstract: 本发明涉及水产动物遗传育种技术领域,公开了一种超雄鲤鱼和遗传雄性而生理雌性鲤鱼的制备方法,采用该方法可以培育出YY型染色体的超雄鲤鱼,本发明获得了雄核发育的超雄YY鲤鱼,并通过微卫星标记亲子鉴定和测交试验确证。YY鲤鱼与普通雌性鲤鱼杂交产生的后代全部为雄性的鲤鱼,不需要进行鲤鱼性别鉴定,直接对这些已知性别的雄性幼鲤进行人工性反转,获得了遗传雄性而生理雌性的鲤鱼。本发明提供的方法培育出的YY超雄鲤鱼可以应用于控制作为外来种的鲤鱼种群,也可应用于鲤鱼的性别决定与分化等基础研究。遗传雄性而生理雌性鲤鱼的制备技术为进一步研制YY型雌性鲤鱼提供借鉴。

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