一种鉴定子鼠基因型的PCR方法

    公开(公告)号:CN103436603A

    公开(公告)日:2013-12-11

    申请号:CN201310296488.2

    申请日:2013-07-15

    Applicant: 东华大学

    Abstract: 本发明涉及一种鉴定子鼠基因型的PCR方法,包括:(1)通过Blast两种品系小鼠的线粒体序列,找到4个SNP位点,选取其中一个位点以子代小鼠线粒体DNA为模板进行PCR扩增;(2)PCR结束后对PCR产物凝胶电泳检测,若出现阳性条带,则进行LDR反应;其中,LDR反应中,每一个SNP位点设计三条探针;(3)LDR结束后,对LDR产物进行凝胶电泳检测,电泳结束后,利用软件提取泳道数据,即可。本发明通过鉴定子代小鼠母本,比较子代表型差异,将母体效应和基因类型联系起来,补充了以往研究中通过改变孕鼠的营养状况或药物激素暴露等方式,从环境因素揭示母体效应的不足,扩展了人们对母体效应的遗传学机制的认识。

    一种检测农田生态环境的高通量多重LDR分型试剂盒

    公开(公告)号:CN101921828B

    公开(公告)日:2012-11-07

    申请号:CN201010102179.3

    申请日:2010-01-28

    Applicant: 东华大学

    Abstract: 本发明涉及一种检测农田生态环境的高通量多重LDR分型试剂盒,包括:农田16种物种的线粒体COI基因通用引物,上游:5′-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3′;下游:5′-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3′;农田16种物种的线粒体COI基因的特异探针序列;以及PCR扩增和LDR检测程序所用试剂。本发明的试剂盒针对COI基因的通用引物有效扩增出所有目标物种序列,保证了各目标序列以及其中低拷贝的模板可被检测到;各目标物种的特异探针进一步又保证了特异性,使各目标序列完全区分出来,实现多重分型定量,从而了解田间捕食结构的变化,维护农田生态环境。

    一种两次bio-bar-code核酸检测技术

    公开(公告)号:CN101078028B

    公开(公告)日:2011-08-31

    申请号:CN200710038929.3

    申请日:2007-03-30

    Applicant: 东华大学

    Abstract: 本发明涉及一种两次bio-bar-code核酸检测技术,步骤包括:(1)磁珠探针、待测DNA和第一组纳米金探针混合,杂交;(2)分离磁珠,洗涤,加洗脱液,继续保温杂交,磁分离,洗涤;(3)重新悬浮沉淀,加入第二组纳米金探针,混合,杂交;(4)分离磁珠,洗涤,加洗脱液,去磁珠,检测上清液。该方法操作简单,特异性和灵敏度较高,易于自动化,有广泛的应用前景。

    利用通用荧光引物和构象敏感凝胶电泳筛查单核苷酸多态性位点法

    公开(公告)号:CN101245388B

    公开(公告)日:2011-02-09

    申请号:CN200810034460.0

    申请日:2008-03-11

    Applicant: 东华大学

    Abstract: 本发明涉及利用通用荧光引物和构象敏感凝胶电泳筛查单核苷酸多态性位点法,该方法首先利用通用引物方案对目的核酸序列区段进行PCR扩增,再应用F-CSGE技术进行高通量快速检测,最后通过DNA测序技术对筛查出的位点进行最终确证。与其他检测方法比较,本发明方法通量更高,检测速度更快,成本更低,可用于检测未知SNP和致病基因的单碱基突变,用于未知单碱基多态性、基因突变、单碱基插入或缺失等单碱基改变的筛查和确认。

    一种基于荧光纳米发光和磁性纳米材料的甲胎蛋白(AFP)的检测方法

    公开(公告)号:CN101441218A

    公开(公告)日:2009-05-27

    申请号:CN200810207243.7

    申请日:2008-12-18

    Applicant: 东华大学

    Abstract: 本发明涉及一种利用CdTe量子点和Fe3O4-Dextran纳米颗粒检测血清中AFP含量的方法,其特征在于其步骤包括(a)Fe3O4-Dextran-第一抗体复合物的制备(b)CdTe-第二抗体复合物的制备(c)绘制“荧光强度一AFP浓度”标准工作曲线,算出工作方程;(d)测定所得荧光强度数值带入工作方程得到肝癌病人AFP的含量。该方法检测手段简单,灵敏度高,可以让很多癌症初期的病人较简易地检测到病情,并及时采取治疗手段,为肝癌的临床检测开辟了一条崭新的道路。

    一种微量DNA的多重PCR检测方法

    公开(公告)号:CN101245389A

    公开(公告)日:2008-08-20

    申请号:CN200810035152.X

    申请日:2008-03-25

    Abstract: 本发明涉及一种微量DNA的多重PCR检测方法,通过改变引物浓度和引物添加方式来避免多重PCR技术中引物过多造成的竞争抑制问题,可用于起始样本非常有限的DNA,尤其是一些很珍贵的临床样本,如受精卵,激光捕获显微切割获得的细胞等。本发明整个检测方案操作过程简单,特异性高,并且灵敏度与PCR效率都很高,易于自动化,在实际应用中有广泛的应用前景。

    一种运用特定区段随机突变法改造漆酶的方法及漆酶菌株LAC123

    公开(公告)号:CN114703212B

    公开(公告)日:2024-03-29

    申请号:CN202210194874.X

    申请日:2022-03-01

    Applicant: 东华大学

    Abstract: 本发明公开了一种运用特定区段随机突变法改造漆酶的方法及漆酶菌株lac123。本发明通过分析,选定LAC1第二结构域和第三结构域靠近漆酶活性位点附近的重要功能区段作为靶标序列,在对该序列DNA进行化学合成时,采用简并引物法在特定的若干个碱基位点引入随机突变,并将合成好的随机片段通过同源重组的方法,对野生酶的相同片段进行替换,构建包含特异区段特定位点DNA序列的随机突变库,通过二代测序对库容量进行检测,并对随机突变库中的大肠杆菌克隆进行漆酶活性的批量筛选,初筛到了5株酶活有所提升的漆酶,经过摇瓶复筛得到一株酶活提升2.3倍的突变漆酶菌株LAC123,其表达蛋白序列如SEQ ID NO:3所示。

    一种基于连接反应的RNA病毒的多重检测方法

    公开(公告)号:CN117385101A

    公开(公告)日:2024-01-12

    申请号:CN202311421024.X

    申请日:2023-10-30

    Applicant: 东华大学

    Abstract: 一种基于连接反应的RNA病毒的多重检测方法,利用连接酶对四种或更多的RNA病毒在同一试管中进行多重连接,该步骤能省略将RNA逆转录成cDNA的过程,在每对探针的5‘端加上通用引物序列,然后可以用通用引物将连接产物进行同时扩增,通过电泳检测扩增产物,以实现RNA病毒的多重检测。针对每个病毒RNA的特异序列设计一对DNA连接探针,利用SplintR连接酶连接与模板RNA互补配对的这一对DNA探针。优化连接探针浓度、退火杂交程序、连接反应温度、连接酶浓度,运用荧光定量PCR和毛细管电泳检测连接产物,建立多重RNA病毒检测方案。

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